一步法RT-gDNA去除qPCR预混液 Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR是Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR的升级版，在满足了可在同一管中进行反转录和基因组去除两个反应的同时，既简化了反应过程、大幅缩短了反应时间，又提高了反转录产物的产量。本产品4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix中含反转录反应所需的全部试剂，反应时只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA，同时去除基因组DNA污染。本产品适合具有复杂的RNA模板的反转录，也非常适合少量模板以及低拷贝基因的反转录。
本产品反转录产物兼容探针法与染料法qPCR，探针法与染料法qPCR Mix分别推荐翌圣Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184)，进行高性能基因表达分析。本产品反转录产物不适用于后续基因克隆等长片段扩增，如果需要，推荐翌圣Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11149、Cat#11150)进行高效反转录。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
11151ES10 |
11151ES60 |
|
11151-A |
4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix |
50 μL |
500 μL |
|
11151-B |
gDNA Remover Mix |
10 μL |
100 μL |
|
11151-C |
RNase-free Water |
1 mL |
2×1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
- 在冰上融化11151-A/B/C组分，将试剂各组分充分震荡混匀，并在RNase-free离心管中配置如下体系：
|
组分 |
体积 （μL） |
|
RNase-free Water |
To 20 μL |
|
4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix |
5 μL |
|
gDNA Remover Mix |
1 μL |
|
Total RNA |
10 pg -5 μg* |
|
or mRNA |
10 pg-500 ng* |
表1 反应体系
*建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5 μg Total RNA。
- 反应程序
|
温度 |
时间 |
|
37℃ |
5 min* |
|
85℃ |
30 s |
表2 反应程序
*该过程包含反转录及gDNA消化。
- 反转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20°C短期保存，长期保存建议分装后于-80°C存放，避免反复冻融。
注意事项
1.所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.本产品仅作科研用途！
Ver.CN20230530
Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR是Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR的升级版，在满足了可在同一管中进行反转录和基因组去除两个反应的同时，既简化了反应过程、大幅缩短了反应时间，又提高了反转录产物的产量。本产品4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix中含反转录反应所需的全部试剂，反应时只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA，同时去除基因组DNA污染。本产品适合具有复杂的RNA模板的反转录，也非常适合少量模板以及低拷贝基因的反转录。
本产品反转录产物兼容探针法与染料法qPCR，探针法与染料法qPCR Mix分别推荐翌圣Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184)，进行高性能基因表达分析。本产品反转录产物不适用于后续基因克隆等长片段扩增，如果需要，推荐翌圣Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11149、Cat#11150)进行高效反转录。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
11151ES10 |
11151ES60 |
|
11151-A |
4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix |
50 μL |
500 μL |
|
11151-B |
gDNA Remover Mix |
10 μL |
100 μL |
|
11151-C |
RNase-free Water |
1 mL |
2×1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
- 在冰上融化11151-A/B/C组分，将试剂各组分充分震荡混匀，并在RNase-free离心管中配置如下体系：
|
组分 |
体积 （μL） |
|
RNase-free Water |
To 20 μL |
|
4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix |
5 μL |
|
gDNA Remover Mix |
1 μL |
|
Total RNA |
10 pg -5 μg* |
|
or mRNA |
10 pg-500 ng* |
表1 反应体系
*建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5 μg Total RNA。
- 反应程序
|
温度 |
时间 |
|
37℃ |
5 min* |
|
85℃ |
30 s |
表2 反应程序
*该过程包含反转录及gDNA消化。
- 反转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20°C短期保存，长期保存建议分装后于-80°C存放，避免反复冻融。
注意事项
1.所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.本产品仅作科研用途！
Ver.CN20230530
Q：这个试剂具备颜色示踪吗？
A：组分A为蓝色，具有加样示踪的作用。
Q: 不做gDNA去除可以吗？
A: 可以，如果RNA提取时候已经处理过gDNA, 可以不加gDNA Remover Mix(组分B），反应体系用RNase-free Water补齐。
Q: 可以扩大反应体系吗？
A: 可以，参考说明书等比例扩大反应体系，注意在使用PCR仪时修改程序上的反应体积。
暂无内容