逆转录预混液(含gDNA污染去除)|RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR

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逆转录预混液(含gDNA污染去除)|RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR是Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)的升级版，可在同一管中进行逆转录和基因组去除两个反应，操作简便，可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和RNA降解的风险。本产品中5×Hifair® One Step RT SuperMix中含逆转录反应所需的全部试剂（Hifair® V Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, Oligo(dT)18 Primer, Random Primer, dNTPs, Buffer)，反应时只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA，同时去除基因组DNA污染。另外，本产品提供了5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置无逆转录酶的对照，判断qPCR模板是否来自cDNA。

本产品中的Hifair® V Reverse Transcriptase可耐受高达60°C的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。逆转录产物兼容探针法与染料法qPCR，探针法与染料法qPCR Mix分别推荐翌圣Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184)，进行高性能基因表达分析。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品规格

11142ES10 (10 T)

11142ES60 (100 T)

11142-A

5×Hifair® One Step RT SuperMix

40 μL

400 μL

11142-B

gDNA Remover Mix

10 μL

100 μL

11142-C

5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix

20 μL

40 μL

11142-D

RNase free H2O

1 mL

2×1 mL

 

产品应用

后续适用于qPCR实验。

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期12个月。

 

注意事项

1）所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. 反应体系配置：在冰上融化11142-A/B/C组分，将试剂各组分充分震荡混匀，并在RNase-free离心管中配置如下体系：

组分

使用量

RNase-free H2O

To 20 μL

5×Hifair® One Step RT SuperMix

4 μL

gDNA Remover Mix

1 μL

Total RNA

10 ng-1μg

No-RT Control反应（可选）

5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置无逆转录酶的对照，判断qPCR模板是否来自cDNA。

组分

使用量

RNase-free H2O

To 20 μL

5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix

4 μL

gDNA Remover Mix

1 μL

Total RNA

10 ng-1μg

 

2. 轻轻混匀，按照如下程序进行逆转录

温度

时间

30°C

5 min

55°C

15 min

85°C

5 min

【注】：1. 逆转录温度：推荐使用55°C。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60°C。

  1. 逆转录产物可立即用于后续qPCR反应，也可-20°C短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80°C保存，避免反复冻融。

HB221019

Q: 反转录后的产物是什么？是双链的DNA吗？

A：反转录后的产物是RNA和cDNA的杂交链，并不是DNA双链，其稳定性相较于后者来说要低一些。

[1] Ji C, Li J, Jiang C, et al. Zinc and nitrogen synergistic act on root-to-shoot translocation and preferential distribution in rice. J Adv Res. 2021;35:187-198. Published 2021 Apr 20. doi:10.1016/j.jare.2021.04.005(IF:10.479)

Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR是Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)的升级版，可在同一管中进行逆转录和基因组去除两个反应，操作简便，可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和RNA降解的风险。本产品中5×Hifair® One Step RT SuperMix中含逆转录反应所需的全部试剂（Hifair® V Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, Oligo(dT)18 Primer, Random Primer, dNTPs, Buffer)，反应时只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA，同时去除基因组DNA污染。另外，本产品提供了5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置无逆转录酶的对照，判断qPCR模板是否来自cDNA。

本产品中的Hifair® V Reverse Transcriptase可耐受高达60°C的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。逆转录产物兼容探针法与染料法qPCR，探针法与染料法qPCR Mix分别推荐翌圣Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184)，进行高性能基因表达分析。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品规格

11142ES10 (10 T)

11142ES60 (100 T)

11142-A

5×Hifair® One Step RT SuperMix

40 μL

400 μL

11142-B

gDNA Remover Mix

10 μL

100 μL

11142-C

5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix

20 μL

40 μL

11142-D

RNase free H2O

1 mL

2×1 mL

 

产品应用

后续适用于qPCR实验。

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期12个月。

 

注意事项

1）所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. 反应体系配置：在冰上融化11142-A/B/C组分，将试剂各组分充分震荡混匀，并在RNase-free离心管中配置如下体系：

组分

使用量

RNase-free H2O

To 20 μL

5×Hifair® One Step RT SuperMix

4 μL

gDNA Remover Mix

1 μL

Total RNA

10 ng-1μg

No-RT Control反应（可选）

5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置无逆转录酶的对照，判断qPCR模板是否来自cDNA。

组分

使用量

RNase-free H2O

To 20 μL

5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix

4 μL

gDNA Remover Mix

1 μL

Total RNA

10 ng-1μg

 

2. 轻轻混匀，按照如下程序进行逆转录

温度

时间

30°C

5 min

55°C

15 min

85°C

5 min

【注】：1. 逆转录温度：推荐使用55°C。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60°C。

  1. 逆转录产物可立即用于后续qPCR反应，也可-20°C短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80°C保存，避免反复冻融。

HB221019

Q: 反转录后的产物是什么？是双链的DNA吗？

A：反转录后的产物是RNA和cDNA的杂交链，并不是DNA双链，其稳定性相较于后者来说要低一些。

[1] Ji C, Li J, Jiang C, et al. Zinc and nitrogen synergistic act on root-to-shoot translocation and preferential distribution in rice. J Adv Res. 2021;35:187-198. Published 2021 Apr 20. doi:10.1016/j.jare.2021.04.005(IF:10.479)