Hieff ® Smearase 是针对高通量测序平台设计的新一代酶切试剂。本品采用高质量的片段化酶，酶切效果稳定，偏好性 低，可有效降低片段化的时间和成本，摆脱了繁琐的超声步骤，让片段化过程变得更加简单高效。

产品组分

组分编号	组分名称	8 T	24 T	96 T
12907	Hieff ® Smearase	80 μL	240 μL	960 μL

 

运输和保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，有效期 1 年。

 

注意事项

1.  本试剂盒兼容范围为 1 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高质量 Input DNA。

2.  若 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA

的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化，EDTA 耐受范围为 0-2 mM。

3. 对于常规的高质量基因组 DNA，酶切时间参考表 1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种 GC 含量的模板。

表 1 常规基因组 DNA 片段化时间推荐表

插入片段主峰大小	片段化时间	优化范围
600 bp	5 min	3-10 min
400 bp	10 min	8-15 min
250 bp	15 min	10-20 min
200 bp	20 min	12-25 min
150 bp	25 min	20-30 min

【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。

4. 参考表 1 片段化时间可将 DNA 酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。

5. 该酶在高温条件下即可失活。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅作科研用途！

 

使用方法

DNA 片段化（DNA Fragment）

该步骤将基因组 DNA 片段化。

1. 将表 2 中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表 2 反应体系。

表 2   DNA 片段化 PCR 反应体系

名称	体积（μL）
Input   DNA	x
Hieff   ® Smearase	10
ddH2O	Up to   60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述 PCR 管置于 PCR 仪，设置表 3 所示反应程序，进行 DNA 片段化反应。

表 3   DNA 片段化 PCR 反应程序

温度	体积（μL）
热盖 105°C	On
4 °C	1 min*
30 °C	3-30 min**
72 °C	10 min
4 °C	Hold

【注】：*DNA 片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置 4℃，待模块温度降至 4℃时，将 PCR 管放入 PCR 仪即可。

**对于完整的基因组 DNA，酶切时间参考表 1。

5. 产物如需纯化，可使用 Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或 AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产 品。

参考实例

使用 Hieff ® Smearase 对 Human gDNA 样本进行酶切，片段化结果见图 1。

 

 

图 1   Hieff ® Smearase 酶切 200 ng Human gDNA 样本（不同酶切时间片段化效果检测）

 

HB210527

 

 

Q：12204ES、12907ES 和 12609ES 区别与联系？

A：12204 为完整的建库试剂盒，包含片段化模块，连接模块，扩增模块。12609 为片段化模块，可同时进行样本的片段化，末端修复/加A流程。12907 为单酶（原料酶），仅用于DNA 片段化。

Q：12907里面的酶是什么酶？能否作用于RNA?产生的片段末端是平末端还是黏性末端？

A：是一些随机内切酶，作用于dsDNA，产生的末端是黏性末端。

Q：产品使用时能否用单酶搭配机械法流程建库试剂盒，如 12907+12199?

A：可以。实际使用时我们建议购买完整试剂盒（Cat#12204）,该试剂盒经过流程的优化可获得优异的建库表现。如果想要购买 12907 搭配其他品牌建库试剂盒，建议片段化之后先进行纯化再接其他品牌建库试剂盒。

Q：酶切模块可否适用 MGI 平台？

A：片段化酶切模块 12907可通用于各类平台

Q：gDNA 片段化参考说明书酶切条件酶切 20 min，竟然切不动？

A：一般优先考虑 DNA 的质量问题，比如 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐离子，可能会影响酶切效果，建议将DNA 稀释在 ddH2O 或不含EDTA 的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中再进行片段化。其次，如果样本是反转录得到的全长cDNA，则需考虑样本纯度问题。另外，对于环状DNA 的酶切，需要另行摸索酶切时间体系。特殊样本可考虑磁珠纯化之后进行酶切或适当延长酶切时间。

Q：酶切时间也不长，竟然过度酶切了?

A：以插入片段 300 bp 为例，白细胞 gDNA，30 度酶切 10min，出现如下图过度酶切现象。建议参考酶切条件需要考虑不同样本gDNA 大小，如白细胞gDNA 较小，应适当缩短酶切时间，否则易出现过度酶切现象。

Q：最低可以切到多小片段？

A：有小片段保护机制，最低可到150bp左右。

[1] Zhang S, Pei Z, Lei C, et al. Detection of cryptic balanced chromosomal rearrangements using high-resolution optical genome mapping [published online ahead of print, 2022 Jun 16]. J Med Genet. 2022;jmedgenet-2022-108553. doi:10.1136/jmedgenet-2022-108553(IF:6.318)
[2] Ren J, Zhang R, Pan C, et al. Prevalence and genotype-phenotype correlations of GBA-related Parkinson disease in a large Chinese cohort. Eur J Neurol. 2022;29(4):1017-1024. doi:10.1111/ene.15230(IF:6.089)