质量控制

1. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg λDNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。

2. 酶切–连接–再酶切检测：最适反应温度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切产物，在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

3. DNase残留检测：将1 μL酶与双链DNA底物在37°C下孵育16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA底物无变化。

使用方法

DNA酶切流程

1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：

*DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BsmBI酶活性。

注：反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性。

2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3）55°C孵育15 min-1 h。一般推荐5-10 U酶/μg质粒DNA，10-20 U酶/μg基因组DNA，孵育1 h。如需过夜酶切，请将酶量调整为1 U。

4）停止反应（可选）：80°C孵育20 min即可使酶失活，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

5）如进行小体系反应，可参考如下反应体系配制（冰上操作）：

注：为避免蒸发，10 μL反应体系的孵育时间不应超过1 h。

不同DNA中的识别位点数

甲基化修饰影响

HB221019

Q：15048ES和15203ES这两款产品的区别是什么？

A：两款产品是同一个酶切位点的同工酶，15203酶切效果更好，但价格相对较贵。15048相对酶切效果弱于15203，并且属于温度敏感型，使用和保存要谨慎，性价比较高。

BsmBI属于Type IIs型内切酶，可识别非回文序列，并在识别序列之外进行切割，常用于Golden Gate组装。本产品提供优化的反应缓冲液，可使BsmBI最大限度发挥功能，同时反应缓冲液包含重组白蛋白，可增强多种酶的稳定性。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。

识别位置

5'-CGTCTC(N)₁↓-3'

3'-GCAGAG(N)₅↑-5'

推荐反应条件

1×BsmBI Buffer；

55°C孵育。

失活条件

80°C孵育20 min。

注意事项

1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；

2）受CpG甲基化影响，序列完全重叠，剪切受阻；

3）受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切可能受影响；

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；

4）本产品仅作科研用途！