Cap1-GAG(3’OMe)钠盐 帽类似物 结构m7(3’OMeG)(5’)ppp(5’)(2’OMeA)pG
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COA
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Cap1-GAG(3’OMe) is a cap analogue with the structure of m7(3’OMeG)(5’)ppp(5’)(2’OMeA)pG, the molecular formula of it is C33H45N15O24P4 and the molecular weight is 1159.60. The product is used for transcription with the initial sequence of 5'AG3', and the natural cap1 structure is produced by Cap1 transcription capping. Compared with cap0 produced by traditional capping method, the cap1 structure produced by cap1-GAG (3’OMe) enables the mRNA to have higher activity and translation efficiency in vivo.
This product is produced in accordance with GMP process requirements and provided in liquid form.
Product Nature
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Molecular Formula |
C33H45N15O24P4 (free acid) |
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Molecular weight |
1159.60(free acid) |
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Concentration |
100 ± 3mM |
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Purity |
≥ 98% |
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Structure |
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Shipping and Storage
This product is shipped with dry ice and can be stored at -15℃ ~ -25℃ for two years.
Notes
1. For your safety and health, please wear personal protective equipment (PPE), such as laboratory coats and disposable gloves, when operating with this product.
HB220514
Cap1-GAG(3’OMe) is a cap analogue with the structure of m7(3’OMeG)(5’)ppp(5’)(2’OMeA)pG, the molecular formula of it is C33H45N15O24P4 and the molecular weight is 1159.60. The product is used for transcription with the initial sequence of 5'AG3', and the natural cap1 structure is produced by Cap1 transcription capping. Compared with cap0 produced by traditional capping method, the cap1 structure produced by cap1-GAG (3’OMe) enables the mRNA to have higher activity and translation efficiency in vivo.
This product is produced in accordance with GMP process requirements and provided in liquid form.
Product Nature
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Molecular Formula |
C33H45N15O24P4 (free acid) |
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Molecular weight |
1159.60(free acid) |
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Concentration |
100 ± 3mM |
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Purity |
≥ 98% |
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Structure |
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Shipping and Storage
This product is shipped with dry ice and can be stored at -15℃ ~ -25℃ for two years.
Notes
1. For your safety and health, please wear personal protective equipment (PPE), such as laboratory coats and disposable gloves, when operating with this product.
HB220514
Q: 你们帽类似物10677ES和10678ES这两款有没有做过验证，哪个加帽效果会好些？
A: 10678ES是形成天然Cap1结构的mRNA；10677ES是形成含有3′OMe修饰Cap1结构的mRNA，已上市的新冠疫苗BNT162b2使用的帽类似物是此结构。他们的作用都是一样的，使用上没有区别，使用10677ES的产量可能会比10678ES的产量会低一些。
Q: 检测时出现帽子类似物挑酶的情况，翌圣的酶搭配客户的其他厂家帽类似物没有产量是什么原因呢？
A: 各家的酶比活差不多但酶活差异较大，例如某公司50U的相当于200-250U的酶，所以在体系不匹配的情况，酶量加少了，帽子就加不上去。
要根据应用场景选择帽子类型，类似于做细胞治疗，基因治疗，只是为了利用mRNA快速表达筛选有用的肿瘤靶点，可以直接选择直接加帽Cap0、Cap1的形式的帽子都可以。 针对于Trilink的体系介绍： CleanCap：NTP=4：5，产量较低，原因就是NTP加少了，在酶法加帽的IVT体系中，NTP的量10mM，所以在共转录加帽体系中建议按照等比例（1：1或5：4）10mM or 8mM。 其实在大规模生产体系中，co-capping的成本会略小于post-capping，因为在要保证加帽率的前提下，酶用量会提升且工艺操作更加复杂。我们是Claencap的帽子，目前我们只有AG帽子，它的加帽率会受到影响主要是因为T7 RNA酶的碱基偏好GG序列。
Q: 帽类似物加帽和酶法加帽如何选择？
A: 工业上酶法加帽最常使用的是牛痘病毒加帽酶处理IVT产物可以将其修饰成Cap 0 mRNA，Cap 0结构可以在二氧甲基转移酶（2'O-methyltransferase）的作用下进一步修饰成Cap 1（m7GpppmN）。利用酶法加帽，加帽效率可以达到95%以上。共转录加帽法操作简便，但由于GTP会竞争帽状二聚体，因此该方法加帽率低一些；两种方式各有优缺点。
Q: 对于一些没有加上帽子的mRNA，会对后续实验比如说做生物制剂等有什么影响？
A: 目前行业对这一块的没有做针对性的去除，行业里面主要是看加帽效率的多少，目前做的比较好的加帽率在80%以上，当然肯定是越高越好了。这个还没有一个绝对的标准。
对于合成之后的mRNA，可以用纯化的方式处理，比如康*的一步膜包，极大的减少了纯化工艺，传统用Oligo d（T）的柱子做纯化，效果好可以回收率70-80%；效果差40-50%，也可以多加一步疏水柱在oligo dT后。
Q: 共转录加帽和两步法加帽对于模板的起始位点的要求？
A: 共转录要求对于模板的起始位点要求必须是 AGG* 开头
两步法对于位点无要求，但我司目前产品对于AGGG起始位点的产量最高，主要是T7酶的偏好性导致。
Q: 对于共转录体系中Clean-cap涉及到的专利问题
A: 目前我们可以提供帽子类似物，据我们了解，现在Trilink在国内专利还没有授权，在国内可以放心使用；据消息，更倾向和CDMO和药企进行授权；目前我们是希望能以代工的形式进行生产合作，但是目前还没有回复。
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