1. 实验准备

1）在使用前，将试剂盒中的各组分恢复至室温，并上下颠倒混匀至少10次保证液体充分混匀。

2）准备足够量Qubit检测专用管并标注。请勿在PCR管侧壁标注，以免影响荧光信号采集。

2. 配制待检样品

1）配制待检标准品。取190 μL检测工作液A组分至标准品PCR管中，分别加入10 μL dsDNA Standard 1和dsDNA Standard 2至相应的标准品PCR管中，轻轻涡旋振荡2–3 sec，尽量避免气泡产生。

2）配制待检样品。取180-199 μL检测工作液至样本PCR管中，分别加入1-20 μL待检样本，使PCR管中每个样本终体积为200 μL，轻轻涡旋振荡2–3 sec，尽量避免气泡产生。

3. 检测

1）将所有待检PCR管置于室温避光孵育2 min。

2）按照Qubit荧光仪的操作说明，选择1×dsDNA High Sensitivity检测程序测定荧光信号值。

附表

污染物对dsDNA定量检测试剂盒检测结果的影响

*1×：表示含有与dsDNA相同浓度的RNA。                                                             

HB221110

Q: 12640与12642的区别是什么？

A: 12642为预混液，即用型的，直接加入样品即可测定浓度，不需要配制染料工作液。

Q: 产品成分只有两个标准品，制作标准曲线的时候需要对 standard 2 进行多梯度稀释吗？

A: 使用Qubit定量的时根据操作步骤两个标准品即可。如果使用酶标仪等，需要多个梯度制作标准曲线，可以使用 1×TE 对standard 2 进行梯度稀释。

Q: 用酶标仪代替Qubit检测，如何选择酶标板？波长如何设定？

A: 选择黑色的酶标板。波长：Ex=480 nm，Em=520 nm。

Q：标准品荧光值与之前使用的有差异？一般标准品的荧光值应该是多少呢？

A：标准品没有一个确定的荧光值，且不同的仪器之间可能都有差异。若要验证，可多做几个复孔或者多做几个梯度，呈线性关系即可。

qubit试剂搭配酶标仪操作流程

1×dsDNA HS Assay Kit是一种快速、灵敏、精确的双链DNA（dsDNA）荧光定量检测试剂盒。本试剂盒对dsDNA具有高度选择性，在0.2-100 ng区间具有很好的线性关系。本试剂盒操作简单方便，使用时只需将检测工作液与待测dsDNA样品混合，即可使用Qubit荧光仪或荧光酶标仪进行读数。操作简单，结果可靠，是NGS大规模DNA样品定量（如Input DNA定量、DNA文库定量等）的理想选择。本试剂盒对常规的污染物如蛋白质、盐类等具有较好的耐受性。

产品组分

运输和保存

冰袋运输，2-8℃避光保存12个月。

注意事项

1.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；

2.使用前请充分平衡至室温，并颠倒混匀至少10次确保液体混匀；

3.对于DNA标准品，每次使用前先上下颠倒数次后瞬时离心数秒（请勿涡旋振荡）；

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅用作科研用途！

实验步骤

一、使用Qubit^®荧光仪进行dsDNA定量检测分析