β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(RG0039)

β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒

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RG0039 β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 >100次 516.00元

β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(In Situ β-galactosidase Staining Kit)是一种用于细胞或组织β-半乳糖苷酶原位染色检测的试剂盒。β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子,通过原位染色,在普通的光学显微镜下就可以用于检测到β-半乳糖苷酶的表达。本试剂盒可以用于组织切片的染色,也可以用于培养细胞的染色。
碧云天生产的β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒,以X-Gal为底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会生成深蓝色产物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
主要特点:本试剂盒经过多方面的优化,能兼容普通的细胞培养用多孔板、移液管等聚苯乙烯类材质耗材或容器的试剂盒。本试剂盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容导致的染色偏弱、染色效果不稳定等情况。通常同类试剂盒要求使用可高温高压灭菌的聚丙烯(polypropylene)材质的耗材、容器或玻璃容器进行溶液的配制,而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)类材质的容器或耗材,否则可能会出现絮状沉淀,影响实验观察。即使严格按照要求操作,也会在染色时间比较长的情况下,容易出现絮状物沉淀(参考图2)。本试剂盒经过多方面的优化,对耗材或容器的材质无特殊要求,可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不会产生沉淀或不溶物,使用更加便捷。

β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(RG0039)

图2. 本试剂盒优化前后的对比图。优化前,X-Gal溶液直接接触聚苯乙烯类材质的材料如移液管、多孔板等会产生明显的腐蚀(A图),使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后,在显微镜下观察有异常的絮状不溶物(C图);优化后,X-Gal溶液直接接触聚苯乙烯类材质的材料观察不到有任何异常情况(B图),使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后,在显微镜下观察也没有任何异常情况(D图)。

如果使用6孔板检测,足够测定100个样品;使用24孔板测定,足够测定400个样品;使用96孔板测定,足够测定1000个样品。对于组织切片或组织块,可以检测的样品数量视样品的大小而定。对于普通切片的滴染足够检测100个样品。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG0039-1 β-半乳糖苷酶染色固定液 100ml
RG0039-2 X-Gal溶液 5ml
RG0039-3 β-半乳糖苷酶染色液A 1ml
RG0039-4 β-半乳糖苷酶染色液B 1ml
RG0039-5 β-半乳糖苷酶染色液C 100ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项:
β-半乳糖苷酶染色固定液对人体有毒、有腐蚀性,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
X-Gal溶液在-20℃或4℃保存会冻结,室温或37℃水浴2-5分钟并适当摇动即可完全融解。
β-半乳糖苷酶染色液B在刚刚溶解后会观察到有沉淀,属正常现象,充分混匀或Vortex后,沉淀会全部溶解。作为常规,试剂使用前必须确保沉淀全部溶解,并且混匀。
使用96孔板等多孔板进行检测时,如果孵育过夜容易产生所谓的“边缘效应”(edge effect),即多孔板四周的孔由于和外界最直接接触,易受外界环境影响,其中最明显的是四周细胞培养孔的蒸发效应。边缘效应会导致细胞生长不均匀、细胞分布不均一、培养液体积不一致、培养液中相关成分的浓度、pH值不一致。建议采取以下方法避免96孔板等多孔板的边缘效应:避免孵育过长时间,以避免蒸发等带来的边缘效应;弃用边缘孔并在弃用的边缘孔中加入等量的水、PBS或其他适当溶液;在多孔板非孔的凹陷处加入适量的水或其他适当溶液;将整块板放在湿盒中;使用防挥发盖;在实验设计时,实验样品最好进行随机分配,不要将某一组样品固定放在某个位置而引入可能的系统性误差。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
对于培养细胞样品:
1. 转染细胞:采取适当的方法将表达β-半乳糖苷酶的质粒转染细胞。转染细胞24-48小时后可以使用本试剂盒进行原位染色,检测β-半乳糖苷酶的表达。

2. 对于6孔板,吸除细胞培养液,加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液,室温固定10分钟。对于其它类型的培养板,固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。

3. 吸除细胞固定液,用PBS洗涤细胞3次,每次3分钟。
4. 吸除PBS,每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制如下:

β-半乳糖苷酶染色液A 10μl
β-半乳糖苷酶染色液B 10μl
β-半乳糖苷酶染色液C 930μl
X-Gal溶液 50μl

5. 37℃孵育20分钟至2小时,或更长时间,直至部分细胞的颜色变蓝。如果孵育时间较长,可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。
6. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数,可以去除染色工作液,加入2毫升PBS,4℃可以保存数天。如果用于计算转染效率,转染效率=染色阳性细胞数/总细胞数×100%。
对于组织切片或非常小的组织块:
1. 对于组织切片或非常小的组织块,加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于10分钟。对于小的组织块,固定时间应该适当延长。
2. 用PBS洗涤组织3次,每次不少于5分钟。对于组织块,时间还要适当延长。
3. 吸除PBS,每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制参照上面对于培养细胞样品的第4步。
4. 37℃孵育20分钟至2小时,或更长时间,直至部分细胞的颜色变蓝。如果孵育时间较长,可以用parafilm或保鲜膜封住放置组织的容器,以防止蒸发。
5. 吸除染色工作液,用PBS洗涤组织3次,每次不少于5分钟。对于组织块,时间还要相应延长。
6. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察,可以去除染色工作液,加入2毫升PBS,4℃可以保存数天。

β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒(RG0039)

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使用本产品的文献:

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