DiD即DiIC₁₈(5)，也称为DiD’ solid，全称为1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-Tetramethylindodicarbocyanine,4-Chlorobenzenesulfonate Salt，是一种远红外细胞膜荧光探针(Far-red Plasma Membrane Fluorescent Probe)。

DiD是DiI的类似物，但具有更长的激发和发射波长，为远红外荧光，在一些细胞和组织染色中更有优势，特别适合用于进行多种荧光的同时染色。

DiD是一种亲脂性羰花青(carbocyanine)染料，具有很长的亲脂性烃链，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色，染色后非常稳定。

DiD可被633nm的氦-氖(He-Ne)激光所激发，DiD在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiD被激发后可以发出远红外的荧光，DiD的分子结构式及和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考图1。其中，最大激发波长为644nm，最大发射波长为665nm。

图1. DiD的分子结构式(A)以及和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱(B)。

DiD的分子式为C₆₇H₁₀₃ClN₂O₃S，分子量为1052.08。

DiD可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF，其中在DMSO中溶解度大于5mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。

DiD被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。DiD通常不会明显影响细胞的生存力(viability)。

DiD除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

用于细胞膜荧光标记时，DiD的常用浓度为1-30µM，最常用的浓度为5-10µM。DiD可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

DiD染色后可以兼容免疫荧光实验。建议使用碧云天的免疫染色通透液(Saponin) (P0095)或使用洋地黄皂苷(ST1272)配制的不会溶解细胞膜的通透液进行通透，其它去垢剂配制的通透液可能会溶解细胞膜上的脂类物质，造成DiD失去结合位置，最终导致DiD的染色失效。但通透也可能会影响DiD在细胞膜上的定位并会增加细胞内的染色，具体实验中需根据实验的需求选择合适的细胞通透液。

包装清单：

4℃避光保存，一年有效。配制的储存液-20℃避光保存，半年有效。

注意事项：

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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