高保真DNA聚合酶|Hieff Canace® II High-Fidelity DNA Polymerase
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产品描述
Hieff Canace®II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成，其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。该酶主要为NGS文库扩增所设计，克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias，同时扩增效率比第一代的Canace高1.5倍，文库扩增产量大幅增加。本产品配备了单独的buffer，并增加了特殊的扩增促进剂，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|
|
10140ES60 |
10140ES76 |
||
|
10140-A |
Hieff Canace®II High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
|
10140-B |
2×Canace®II PCR buffer (含Mg2+, dNTPs) |
3×1 mL |
15×1 mL |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！
使用方法
在使用前，请务必仔细阅读使用说明。
1. PCR反应体系（推荐冰上配制）
表1 PCR扩增反应体系
|
组分 |
体积 (μL) |
|
ddH2O |
to 50 |
|
2×Canace®Ⅱ PCR buffer (含Mg2+, dNTPs) |
25 |
|
模板或接头连接产物 |
X |
|
NGS Primer 1 (10-25 μM) |
1 |
|
NGS Primer 2 (10-25 μM) |
1 |
|
Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
1 |
【注】： 1) 试剂使用：使用前要充分解冻混匀；
2) 聚合酶浓度：50 μL体系推荐使用1 U，可以在0.5-2 U之间进行优化；
3) Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索；
4) 高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
2. PCR扩增程序
表2 PCR扩增反应程序
|
温度 |
时间 |
循环数 |
|
98℃ |
1 min |
1 |
|
98℃ |
10 sec |
1~15（根据实验要求） |
|
60℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
5 min |
1 |
|
4℃ |
Hold |
– |
HB221220
产品描述
Hieff Canace®II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成，其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。该酶主要为NGS文库扩增所设计，克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias，同时扩增效率比第一代的Canace高1.5倍，文库扩增产量大幅增加。本产品配备了单独的buffer，并增加了特殊的扩增促进剂，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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10140ES60 |
10140ES76 |
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10140-A |
Hieff Canace®II High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
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10140-B |
2×Canace®II PCR buffer (含Mg2+, dNTPs) |
3×1 mL |
15×1 mL |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！
使用方法
在使用前，请务必仔细阅读使用说明。
1. PCR反应体系（推荐冰上配制）
表1 PCR扩增反应体系
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组分 |
体积 (μL) |
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ddH2O |
to 50 |
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2×Canace®Ⅱ PCR buffer (含Mg2+, dNTPs) |
25 |
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模板或接头连接产物 |
X |
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NGS Primer 1 (10-25 μM) |
1 |
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NGS Primer 2 (10-25 μM) |
1 |
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Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
1 |
【注】： 1) 试剂使用：使用前要充分解冻混匀；
2) 聚合酶浓度：50 μL体系推荐使用1 U，可以在0.5-2 U之间进行优化；
3) Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索；
4) 高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
2. PCR扩增程序
表2 PCR扩增反应程序
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温度 |
时间 |
循环数 |
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98℃ |
1 min |
1 |
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98℃ |
10 sec |
1~15（根据实验要求） |
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60℃ |
30 sec |
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72℃ |
30 sec |
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72℃ |
5 min |
1 |
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4℃ |
Hold |
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HB221220
Q:Canace 具有保真性的原理是？错配率是多少？能保证不突变吗？
A:a）原理是具有 3’-5’的核酸外切酶活性，即有校正功能。
b）Taq 酶错配率：2*10-4，0.0002，大约 5kb 有一个碱基发生突变。Canace 约 0.00039%， 是 taq 酶的 52 倍。
c）高保真酶是突变概率低，但不是绝对的不突变。
Q:Canace 高保真酶是否为热启动高保真酶？
A:暂时不是热启动，后续会有热启动高保真酶。
Q:Canace 扩增产物是平末端吗？
A:是。因为高保真酶具有 3’-5’的核酸外切酶活性，会将 3’A 进行切除。
Q:Canace 扩增后是平末端产物，如何加 A 尾？
A:仅供参考：先对平末端 PCR 产物纯化后，浓度要求至少 20ng/ ul（跑胶图像条带清晰，明亮即可），取 14.5 ul PCR 产物，加入 2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq 酶，在 72℃反应 10~20min, 后直接回收纯化加 A 尾的DNA 片段。
Q:XX 品牌的高保真酶产品能用Canace 替代吗？
A:高保真酶都可以替代。只是在某些具体参数上有些区别。
Q:Canace 可以用于酵母菌液呢？
A:不建议用。若要用则需通过煮沸，反复冻融，加蜗牛酶等等处理方法破壁后尝试。
Q:Canace 能否用于 XX 长度的片段？
A:验证范围内长度理论上是可以的（验证范围：简单模板 20kb，复杂模板 10kb）。但具体能否扩出，还与模板和引物等有关。
Q:Canace 是否适合做多重 qPCR？
A:未验证过多重。
Q:Canace 的相关应用是？
A:平末端克隆，点突变，高保真性PCR。
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