2× Frag/Prime Buffer RNA片段化/一链cDNA合成缓冲液

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309),替代其中的Frag/Prime buffer使用,用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA,也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA,没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中,可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。

 

产品组分

组分编号

组分名称

8 T

24 T

96 T

11377-A

2 × Frag/Prime Buffer

68 μL

204 μL

816 μL

 

运输与保存方法

干冰运输-20 °C存放,有效期一年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O,避免Mg2+的存在干扰片段化效果;Input RNA最大投入体积为8.5 μL,在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。

3. 本产品仅作科研用途!为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

使用方法

Input RNA不需要片段化处理时,请选择方案A;当Input RNA需要片段化处理时,请选择方案B

A1. Input RNA无需片段化处理,可结合Cat#12309试剂,按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。

1 直接进行第一链cDNA合成反应体系

名称

体积 (μL)

Input RNA

8.5

2×Frag/Prime Buffer

8.5

Strand Specificity Reagent

6

1st Strand Enzyme Mix

2

Total

25

A2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309进行后续反应。

2 第一链cDNA合成反应程序

温度

时间

热盖 105 °C

On

25 °C

10 min

42 °C

15 min

70 °C

15 min

4 °C

Hold

B1. Input RNA需要进行片段化处理,可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。

3 片段化反应体系

名称

体积 (μL)

Input RNA

8.5

2×Frag/Prime Buffer

8.5

Total

17

B2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,根据Input RNA的完整度和实验目的,参考Cat#12309说明书设置合适的片段化条件。

B3. 片段化产物进行一链cDNA合成,按照表4配制一链cDNA合成反应体系。

4 第一链cDNA合成反应体系

名称

体积 (μL)

Fragmented RNA

17

Strand Specificity Reagent

6

1st Strand Enzyme Mix

2

Total

25

B4. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309进行后续反应。

HB220803

 

2× Frag/Prime Buffer RNA片段化/一链cDNA合成缓冲液

暂无内容

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暂无内容

本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309),替代其中的Frag/Prime buffer使用,用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA,也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA,没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中,可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。

 

产品组分

组分编号

组分名称

8 T

24 T

96 T

11377-A

2 × Frag/Prime Buffer

68 μL

204 μL

816 μL

 

运输与保存方法

干冰运输-20 °C存放,有效期一年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O,避免Mg2+的存在干扰片段化效果;Input RNA最大投入体积为8.5 μL,在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。

3. 本产品仅作科研用途!为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

使用方法

Input RNA不需要片段化处理时,请选择方案A;当Input RNA需要片段化处理时,请选择方案B

A1. Input RNA无需片段化处理,可结合Cat#12309试剂,按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。

1 直接进行第一链cDNA合成反应体系

名称

体积 (μL)

Input RNA

8.5

2×Frag/Prime Buffer

8.5

Strand Specificity Reagent

6

1st Strand Enzyme Mix

2

Total

25

A2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309进行后续反应。

2 第一链cDNA合成反应程序

温度

时间

热盖 105 °C

On

25 °C

10 min

42 °C

15 min

70 °C

15 min

4 °C

Hold

B1. Input RNA需要进行片段化处理,可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。

3 片段化反应体系

名称

体积 (μL)

Input RNA

8.5

2×Frag/Prime Buffer

8.5

Total

17

B2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,根据Input RNA的完整度和实验目的,参考Cat#12309说明书设置合适的片段化条件。

B3. 片段化产物进行一链cDNA合成,按照表4配制一链cDNA合成反应体系。

4 第一链cDNA合成反应体系

名称

体积 (μL)

Fragmented RNA

17

Strand Specificity Reagent

6

1st Strand Enzyme Mix

2

Total

25

B4. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309进行后续反应。

HB220803

 

2× Frag/Prime Buffer RNA片段化/一链cDNA合成缓冲液

暂无内容

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