探针法2×实时定量PCR扩增预混液|qPCR TaqMan Probe Master Mix

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探针法2×实时定量PCR扩增预混液|qPCR TaqMan Probe Master Mix

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产品描述
本产品是探针法2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。采用的抗体法热启动Unicon® DNA聚合酶（货号：10113ES）可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。同时，配方优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，适合低浓度模板的扩增，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11205ES03（1 mL）

11205ES08（5 mL）

11205ES25（25 mL）

11205-A

2×Hieff Unicon® qPCR TaqMan Probe Master Mix

1 mL

1 mL × 5

25 mL

11205-B

50×Low Rox

40 μL

200 μL

1 mL

11205-C

50×High Rox

40 μL

200 μL

1 mL

 

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存，有效期18个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分

体积（μL）

体积（μL）

终浓度

2×Hieff Unicon® qPCR TaqMan Probe Master Mix

10

25

1×

Forward Primer (10 μM)

0.4

1

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.4

1

0.2 μM

TaqMan Probe (10 μM)

0.2

0.5

0.1 μM

50×High or Low Rox

0.4

1

1×

模板DNA

X

X

–

无菌超纯水

to 20

to 50

–

【注】： 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 参比染料：Rox的添加，可根据不同仪器型号进行选择，具体可参考【适用机型】。

b) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

c) 探针浓度：探针终浓度在50 nM-250 nM之间。

d) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

e) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。

f) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

g) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

扩增程序 （两步法程序）

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95℃

1 min

1

变性

95℃

10 sec

  

退火、延伸

60℃

30 sec

40

【注】 
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当增加预变性时间至3 – 5 min。

b) 退火温度和时间：建议在56-64℃范围内调整。如果反应效果不好，可以适当延长反应时间。

c) 荧光信号采集：请参考仪器设置。

 

结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。
反应结束后需要确认扩增曲线。进行PCR定量时，需要制作标准曲线。
反应特异性需要琼脂糖凝胶电泳确认。

 

引物设计指南

1）推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳，不要低于100 bp，可以在100 bp-300 bp内选择。

2）正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。

3）引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。

4）引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5）引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。

 

TaqMan 探针设计指南

1）探针长度一般为18-40 bp。探针序列应尽量接近正向或者反向引物，但不能与之有重合区域。

2）探针的退火温度应为 65-67℃。

3）引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基。探针5’端应避免使用碱基G。

4）若序列中包含多态性位点，应使其位于探针序列中间。

 

适用机型
High Rox适用机型：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™;
Low Rox 适用机型：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™6,7,12k Flex;
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;  
不需要Rox校正的仪器型号：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™;
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96;
Thermo Scientific PikoReal Cycler;
Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR. 

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Hieff Unicon® TaqMan multiplex qPCR master mix

11208ES08

5 mL

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

11211ES03

1 mL

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)

11212ES03

1 mL

Hieff® anti-Taq DNA Polymerase Antibody  Taq酶单克隆抗体

31301ES60

100 µg

Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100 U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100   mM）

10128ES72

250 μL

HB210604

探针法2×实时定量PCR扩增预混液|qPCR TaqMan Probe Master Mix

暂无内容

[1] Huang T, Li X, Wang F, et al. The CREB/KMT5A complex regulates PTP1B to modulate high glucose-induced endothelial inflammatory factor levels in diabetic nephropathy. Cell Death Dis. 2021;12(4):333. Published 2021 Mar 29. doi:10.1038/s41419-021-03629-4(IF:8.469)
[2] Ma H, Lin J, Li L, et al. Formaldehyde reinforces pro-inflammatory responses of macrophages through induction of glycolysis. Chemosphere. 2021;282:131149. doi:10.1016/j.chemosphere.2021.131149(IF:7.086)
[3] Lu L, Li X, Zhong Z, et al. KMT5A downregulation participated in High Glucose-mediated EndMT via Upregulation of ENO1 Expression in Diabetic Nephropathy. Int J Biol Sci. 2021;17(15):4093-4107. Published 2021 Oct 3. doi:10.7150/ijbs.62867(IF:6.582)
[4] Lu L, Zhong Z, Gu J, Nan K, Zhu M, Miao C. ets1 associates with KMT5A to participate in high glucose-mediated EndMT via upregulation of PFN2 expression in diabetic nephropathy. Mol Med. 2021;27(1):74. Published 2021 Jul 8. doi:10.1186/s10020-021-00339-7(IF:6.354)
[5] Li X, Lu L, Hou W, et al. The SETD8/ELK1/bach1 complex regulates hyperglycaemia-mediated EndMT in diabetic nephropathy. J Transl Med. 2022;20(1):147. Published 2022 Mar 29. doi:10.1186/s12967-022-03352-4(IF:5.531)
[6] Shen X, Chen X, Wang J, et al. SET8 suppression mediates high glucose-induced vascular endothelial inflammation via the upregulation of PTEN. Exp Mol Med. 2020;52(10):1715-1729. doi:10.1038/s12276-020-00509-3(IF:5.418)
[7] Qi J, Chen X, Wu Q, et al. Fasting Induces Hepatocellular Carcinoma Cell Apoptosis by Inhibiting SET8 Expression. Oxid Med Cell Longev. 2020;2020:3985089. Published 2020 Mar 19. doi:10.1155/2020/3985089(IF:5.076)
[8] Zeng W, Ren J, Li Z, et al. Levistolide A Inhibits PEDV Replication via Inducing ROS Generation. Viruses. 2022;14(2):258. Published 2022 Jan 27. doi:10.3390/v14020258(IF:5.048)
[9] Li D, Ma H, Shu Q, et al. Arsenite inhibits M2a polarization of macrophages through downregulation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma [published online ahead of print, 2022 Jun 28]. Toxicol Appl Pharmacol. 2022;450:116142. doi:10.1016/j.taap.2022.116142(IF:4.460)
[10] Long J, Liu L, Zhou X, Lu X, Qin L. HLA-DQB1-AS1 Promotes Cell Proliferation, Inhibits Apoptosis, and Binds with ZRANB2 Protein in Hepatocellular Carcinoma. J Oncol. 2022;2022:7130634. Published 2022 May 11. doi:10.1155/2022/7130634(IF:4.375)
[11] Hou W, Lu L, Li X, Sun M, Zhu M, Miao C. c-Myc participates in high glucose-mediated endothelial inflammation via upregulation of IRAK1 expression in diabetic nephropathy. Cell Signal. 2022;92:110263. doi:10.1016/j.cellsig.2022.110263(IF:4.315)
[12] Ma H, Ding Z, Xie Y, et al. Methylglyoxal produced by tumor cells through formaldehyde-enhanced Warburg effect potentiated polarization of tumor-associated macrophages. Toxicol Appl Pharmacol. 2022;438:115910. doi:10.1016/j.taap.2022.115910(IF:4.219)
[13] Cao N, Tang Z, Zhang X, et al. Development and Application of a Triplex TaqMan Quantitative Real-Time PCR Assay for Simultaneous Detection of Feline Calicivirus, Feline Parvovirus, and Feline Herpesvirus 1. Front Vet Sci. 2022;8:792322. Published 2022 Feb 8. doi:10.3389/fvets.2021.792322(IF:3.412)
[14] Qi J, Wu Q, Cheng Q, Chen X, Zhu M, Miao C. High Glucose Induces Endothelial COX2 and iNOS Expression via Inhibition of Monomethyltransferase SETD8 Expression. J Diabetes Res. 2020;2020:2308520. Published 2020 Feb 23. doi:10.1155/2020/2308520(IF:2.965)

产品描述
本产品是探针法2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。采用的抗体法热启动Unicon® DNA聚合酶（货号：10113ES）可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。同时，配方优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，适合低浓度模板的扩增，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11205ES03（1 mL）

11205ES08（5 mL）

11205ES25（25 mL）

11205-A

2×Hieff Unicon® qPCR TaqMan Probe Master Mix

1 mL

1 mL × 5

25 mL

11205-B

50×Low Rox

40 μL

200 μL

1 mL

11205-C

50×High Rox

40 μL

200 μL

1 mL

 

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存，有效期18个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分

体积（μL）

体积（μL）

终浓度

2×Hieff Unicon® qPCR TaqMan Probe Master Mix

10

25

1×

Forward Primer (10 μM)

0.4

1

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.4

1

0.2 μM

TaqMan Probe (10 μM)

0.2

0.5

0.1 μM

50×High or Low Rox

0.4

1

1×

模板DNA

X

X

–

无菌超纯水

to 20

to 50

–

【注】： 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 参比染料：Rox的添加，可根据不同仪器型号进行选择，具体可参考【适用机型】。

b) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

c) 探针浓度：探针终浓度在50 nM-250 nM之间。

d) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

e) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。

f) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

g) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

扩增程序 （两步法程序）

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95℃

1 min

1

变性

95℃

10 sec

  

退火、延伸

60℃

30 sec

40

【注】 
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当增加预变性时间至3 – 5 min。

b) 退火温度和时间：建议在56-64℃范围内调整。如果反应效果不好，可以适当延长反应时间。

c) 荧光信号采集：请参考仪器设置。

 

结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。
反应结束后需要确认扩增曲线。进行PCR定量时，需要制作标准曲线。
反应特异性需要琼脂糖凝胶电泳确认。

 

引物设计指南

1）推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳，不要低于100 bp，可以在100 bp-300 bp内选择。

2）正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。

3）引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。

4）引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5）引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。

 

TaqMan 探针设计指南

1）探针长度一般为18-40 bp。探针序列应尽量接近正向或者反向引物，但不能与之有重合区域。

2）探针的退火温度应为 65-67℃。

3）引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基。探针5’端应避免使用碱基G。

4）若序列中包含多态性位点，应使其位于探针序列中间。

 

适用机型
High Rox适用机型：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™;
Low Rox 适用机型：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™6,7,12k Flex;
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;  
不需要Rox校正的仪器型号：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™;
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96;
Thermo Scientific PikoReal Cycler;
Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR. 

 

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货号

规格

Hieff Unicon® TaqMan multiplex qPCR master mix

11208ES08

5 mL

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

11211ES03

1 mL

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)

11212ES03

1 mL

Hieff® anti-Taq DNA Polymerase Antibody  Taq酶单克隆抗体

31301ES60

100 µg

Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100 U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100   mM）

10128ES72

250 μL

HB210604

探针法2×实时定量PCR扩增预混液|qPCR TaqMan Probe Master Mix

暂无内容

[1] Huang T, Li X, Wang F, et al. The CREB/KMT5A complex regulates PTP1B to modulate high glucose-induced endothelial inflammatory factor levels in diabetic nephropathy. Cell Death Dis. 2021;12(4):333. Published 2021 Mar 29. doi:10.1038/s41419-021-03629-4(IF:8.469)
[2] Ma H, Lin J, Li L, et al. Formaldehyde reinforces pro-inflammatory responses of macrophages through induction of glycolysis. Chemosphere. 2021;282:131149. doi:10.1016/j.chemosphere.2021.131149(IF:7.086)
[3] Lu L, Li X, Zhong Z, et al. KMT5A downregulation participated in High Glucose-mediated EndMT via Upregulation of ENO1 Expression in Diabetic Nephropathy. Int J Biol Sci. 2021;17(15):4093-4107. Published 2021 Oct 3. doi:10.7150/ijbs.62867(IF:6.582)
[4] Lu L, Zhong Z, Gu J, Nan K, Zhu M, Miao C. ets1 associates with KMT5A to participate in high glucose-mediated EndMT via upregulation of PFN2 expression in diabetic nephropathy. Mol Med. 2021;27(1):74. Published 2021 Jul 8. doi:10.1186/s10020-021-00339-7(IF:6.354)
[5] Li X, Lu L, Hou W, et al. The SETD8/ELK1/bach1 complex regulates hyperglycaemia-mediated EndMT in diabetic nephropathy. J Transl Med. 2022;20(1):147. Published 2022 Mar 29. doi:10.1186/s12967-022-03352-4(IF:5.531)
[6] Shen X, Chen X, Wang J, et al. SET8 suppression mediates high glucose-induced vascular endothelial inflammation via the upregulation of PTEN. Exp Mol Med. 2020;52(10):1715-1729. doi:10.1038/s12276-020-00509-3(IF:5.418)
[7] Qi J, Chen X, Wu Q, et al. Fasting Induces Hepatocellular Carcinoma Cell Apoptosis by Inhibiting SET8 Expression. Oxid Med Cell Longev. 2020;2020:3985089. Published 2020 Mar 19. doi:10.1155/2020/3985089(IF:5.076)
[8] Zeng W, Ren J, Li Z, et al. Levistolide A Inhibits PEDV Replication via Inducing ROS Generation. Viruses. 2022;14(2):258. Published 2022 Jan 27. doi:10.3390/v14020258(IF:5.048)
[9] Li D, Ma H, Shu Q, et al. Arsenite inhibits M2a polarization of macrophages through downregulation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma [published online ahead of print, 2022 Jun 28]. Toxicol Appl Pharmacol. 2022;450:116142. doi:10.1016/j.taap.2022.116142(IF:4.460)
[10] Long J, Liu L, Zhou X, Lu X, Qin L. HLA-DQB1-AS1 Promotes Cell Proliferation, Inhibits Apoptosis, and Binds with ZRANB2 Protein in Hepatocellular Carcinoma. J Oncol. 2022;2022:7130634. Published 2022 May 11. doi:10.1155/2022/7130634(IF:4.375)
[11] Hou W, Lu L, Li X, Sun M, Zhu M, Miao C. c-Myc participates in high glucose-mediated endothelial inflammation via upregulation of IRAK1 expression in diabetic nephropathy. Cell Signal. 2022;92:110263. doi:10.1016/j.cellsig.2022.110263(IF:4.315)
[12] Ma H, Ding Z, Xie Y, et al. Methylglyoxal produced by tumor cells through formaldehyde-enhanced Warburg effect potentiated polarization of tumor-associated macrophages. Toxicol Appl Pharmacol. 2022;438:115910. doi:10.1016/j.taap.2022.115910(IF:4.219)
[13] Cao N, Tang Z, Zhang X, et al. Development and Application of a Triplex TaqMan Quantitative Real-Time PCR Assay for Simultaneous Detection of Feline Calicivirus, Feline Parvovirus, and Feline Herpesvirus 1. Front Vet Sci. 2022;8:792322. Published 2022 Feb 8. doi:10.3389/fvets.2021.792322(IF:3.412)
[14] Qi J, Wu Q, Cheng Q, Chen X, Zhu M, Miao C. High Glucose Induces Endothelial COX2 and iNOS Expression via Inhibition of Monomethyltransferase SETD8 Expression. J Diabetes Res. 2020;2020:2308520. Published 2020 Feb 23. doi:10.1155/2020/2308520(IF:2.965)