qubit试剂搭配酶标仪操作流程

产品描述

ssDNA Assay Kit 是一种简便、灵敏、精确的单链 DNA（ssDNA)荧光定量检测试剂盒，在 1~200 ng 区间具有良好的线性关系。本试剂盒包含荧光检测试剂、缓冲液及相关的 ssDNA 标准品，使用前先将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液，然后加入待测 ssDNA 样品，即可使用荧光酶标仪或 Qubit荧光仪进行读数。试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA，但它对常规的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。

产品组分

运输和保存

冰袋运输，2-8℃避光保存，有效期1年，请注意避免反复冻融。

注意事项

1. 特别注意：ssDNA Reagent在2-8℃储存条件下为结冰状态，使用时提前放置室温解冻，务必确认完全溶解，充分混匀后再使用；若有沉淀物，可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育， 并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解；
2. 试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA，待检样品应避免双链DNA污染；
3. 检测试剂ssDNA Buffer略起泡，使用时轻柔震荡或颠倒混匀，避免剧烈震荡；
4. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
5. 对于检测试剂和ssDNA标准品，每次使用前轻柔震荡或上下颠倒数次后瞬时离心数秒（请勿涡旋振荡）；
6. 为保证定量结果的精确，请使用校准后的移液器操作，样品浓度较低时请增大待测样品投入体积；
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
8. 本产品仅用作科研用途！

实验步骤

使用Qubit荧光仪进行ssDNA定量检测分析

1. 实验准备

1. 使用前，将试剂盒中的各组分恢复至室温（室温放置约半小时），检查ssDNA Reagent（组分A）是否有沉淀，若有沉淀物，可将该试剂至于37℃水浴锅中温育，并轻柔混匀直至沉淀物完全溶解；
2. 准备足够量0.5 mL PCR薄壁管并标注。请勿在PCR管侧壁标注，以免影响荧光信号采集。推荐使用本公司Qubit专用检测管（货号83509ES）

2. 配制检测工作液

在避光塑料容器中，使用ssDNA Buffer按比例将适量ssDNA Reagent稀释至1×（例：取1 μL ssDNA Reagent，加入199 μL ssDNA Buffer），上下颠倒混匀。工作液现用现配，每次配制检测工作液时要使用洁净的容器；

3. 配制待检样品

1. 配制待检标准品1和标准品2：取190 μL检测工作液至标准品PCR管中，分别加入10 μL ssDNA Standard 1和ssDNA Standard 2至相应标记的标准品PCR管中，轻柔涡旋振荡2-3 sec，尽量避免气泡产生，瞬时离心数秒；
2. 配制待检样品：取180-199 μL检测工作液至样本PCR管中，分别加入20-1 μL待检样本，使PCR管中每个样本终体积为200 μL，轻轻涡旋振荡2-3 sec，尽量避免气泡产生；

4. 检测

1. 将所有待检PCR管置于室温避光孵育2 min；瞬离收集管壁上液体。
2. 按照Qubit荧光仪的操作说明，选择ssDNA检测程序，使用待检标准品校正荧光曲线后进行待检样品的浓度测定。

附表1

污染物对ssDNA定量检测试剂盒检测结果的影响

HB230412