Hifair®第三代耐热逆转录酶 新一代逆转录酶|Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶，与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比，其cDNA合成速度快，且热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达19.8 kb的cDNA。
产品信息
|
货号 |
11111ES92 / 11111ES93 / 11111ES08 |
|
规格 |
10,000 U / 50,000 U/ 5 mL |
|
单位定义 |
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。 |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
11111ES92 |
11111ES93 |
11111ES08 |
|
11111-A |
5×Hifair® Ⅲ Buffer |
250 μL |
1,250 μL |
25 mL |
|
11111-B |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
50 μL |
250 μL |
5 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期18个月。
使用说明
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
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组分 |
使用量 |
|
RNase free ddH2O |
to 13 μL |
|
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) |
1 μL or 1 μL or 1 μL |
|
模板RNA |
Total RNA: 10 pg – 5 μg或mRNA: 10 pg – 500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
|
上一步的反应液 |
13 μL |
|
5×Hifair® Ⅲ Buffer |
4 μL |
|
dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
|
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
1 μL |
|
RNase inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
3. 逆转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
25℃* |
5 min |
|
55℃** |
15-30 min*** |
|
85℃**** |
5 min |
*当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆转录温度：推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至60℃。
***可将逆转录时间延长到45-60min，有助于提高产量。
****85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230426
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶，与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比，其cDNA合成速度快，且热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达19.8 kb的cDNA。
产品信息
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货号 |
11111ES92 / 11111ES93 / 11111ES08 |
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规格 |
10,000 U / 50,000 U/ 5 mL |
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单位定义 |
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。 |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
11111ES92 |
11111ES93 |
11111ES08 |
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11111-A |
5×Hifair® Ⅲ Buffer |
250 μL |
1,250 μL |
25 mL |
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11111-B |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
50 μL |
250 μL |
5 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期18个月。
使用说明
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
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组分 |
使用量 |
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RNase free ddH2O |
to 13 μL |
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Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) |
1 μL or 1 μL or 1 μL |
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模板RNA |
Total RNA: 10 pg – 5 μg或mRNA: 10 pg – 500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
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上一步的反应液 |
13 μL |
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5×Hifair® Ⅲ Buffer |
4 μL |
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dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
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Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
1 μL |
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RNase inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
3. 逆转录程序设置
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温度 |
时间 |
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25℃* |
5 min |
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55℃** |
15-30 min*** |
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85℃**** |
5 min |
*当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆转录温度：推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至60℃。
***可将逆转录时间延长到45-60min，有助于提高产量。
****85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230426
暂无内容
[1] Wang J, Song J, Song G, et al. Acetyl-L-carnitine improves erectile function in bilateral cavernous nerve injury rats via promoting cavernous nerve regeneration. Andrology. 2022;10(5):984-996. doi:10.1111/andr.13187(IF:3.842)
[2] Wang J, Jia Z, Dang H, Zou J. Meteorin-like/Meteorin-β upregulates proinflammatory cytokines via NF-κB pathway in grass carp Ctenopharyngodon idella. Dev Comp Immunol. 2022;127:104289. doi:10.1016/j.dci.2021.104289(IF:3.636)