MolPure^® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA。

该前处理试剂盒可与本公司的多种宿主细胞DNA残留（qPCR法）检测试剂盒配合使用，包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41301ES）、HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41302ES）、Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41303ES）和E.coli残留DNA检测试剂盒（Cat#41304ES）。

 

产品组分

类别	组分编号	组分名称	产品编号/规格
			18461ES25 （25 T）	18461ES60 （100 T）
Part I	18461-A	蛋白酶K（20 mg/mL）	0.5 mL/支×1支	1 mL/支×2支
Part Ⅱ	18461-B	磁珠悬浮液	0.5 mL/支×1支	1 mL/支×2支
	18461-C	裂解液	2.5 mL/瓶×1瓶	10 mL/瓶×1瓶
	18461-D	结合液	10 mL/瓶×1瓶	40 mL/瓶×1瓶
	18461-E	洗涤液A*	6 mL/瓶×1瓶 （需加9 mL乙醇）	24 mL/瓶×1瓶 （需加36 mL乙醇）
	18461-F	洗涤液B*	3 mL/瓶×1瓶 （需加12 mL乙醇）	12 mL/瓶×1瓶 （需加48 mL乙醇）
	18461-G	洗脱液	2.5 mL/瓶×1瓶	10 mL/瓶×1瓶
Part Ⅲ	18461-H	糖原	225 μL/支×1支	900 μL/支×1支
	18461-I	Poly A钾盐	150 μL/支×1支	600 μL/支×1支

 

运输和保存方法

1. Part I组分冰袋运输，4℃可保存1年，长期保存于-20℃。

2. Part II组分室温运输，室温保存，有效期1年。

3. Part Ⅲ组分干冰运输，-20℃保存1年。

4. 收到货后，请检查Part I、Part II和Part Ⅲ共3个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

 

注意事项

1. 使用前请详细阅读使用说明书，严格按照使用说明书操作，样本处理建议在超净台或生物安全柜中进行。

2. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季室温为低温环境时），可37℃水浴至溶液澄清，避免影响使用效果。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 处理样本及加样时，勤换枪头，避免交叉污染。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途。

 

实验前准备

1. 自备设备：漩涡振荡器、水浴锅或金属浴、离心机、磁性分离架、杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪或其他品牌全自动化核酸提取仪。

2. 自备耗材：10μL-1000μL不等的低吸附带滤芯枪头、1.5 mL低吸附离心管、PCR 8连管或96孔板及相应的管盖或覆膜。

3. 自备试剂：无水乙醇（分析纯）、1×PBS缓冲液（pH 7.4，无 Mg 和 Ca 离子）、超纯水。

【注】：推荐您购买本公司的超纯水（Cat#10116ES）。

4. 首次使用时，需在洗涤液A*和洗涤液B*瓶中加入标签或说明书中注明体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的乙醇含量。

一、手工提取操作方法

1. 样本处理

1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本，可用1×PBS（pH7.4，无Ca和Mg）对样本进行适当比例稀释后提取（对样本进行稀释是为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围之内，通常可考虑进行100倍稀释）。

1.2 待测样本为干粉的，可用超纯水将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。

1.3 待测样本为复杂背景基质的，可根据需要进行加标回收实验，以确定合适的样本稀释倍数。

2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，涡旋混匀10 sec。

【注】：样本蛋白浓度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量为10 μL；样本蛋白浓度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量为20 μL。

3. 60℃孵育20 min。

4. 孵育完成后，加入400 μL结合液、9 μL糖原和6 μL Poly A钾盐涡旋混匀。  

5. 加入20 μL磁珠，涡旋混匀后，放置10 min，每隔3 min涡旋混匀10 sec。

【注】：磁珠使用前需涡旋混匀，保证磁珠彻底重悬。在一次性加样4-5次后，建议再次混匀后再行加样。

6. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸出液体。

7. 加入500 μL洗涤液A（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡或涡旋混匀，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。

8. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸取液体。

9. 加入500 μL洗涤液B（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡或涡旋混匀，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。

10. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸取液体。

11. 为保证尽量吸出残留液体，可将离心管快速离心10 sec后，置于磁力架上用10 μL移液器吸出残留液体。

12. 打开管盖，室温放置3 min直至乙醇完全挥发。观察到磁珠表面无反光或出现裂隙即表明乙醇已挥发完全。

13. 将离心管从磁力架上取下，加入50-100 μL 65℃预热的洗脱液，振荡混匀，短暂离心后，65℃孵育5 min，期间可振荡混匀1次。

14. 短暂离心后，将离心管放置于磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附，小心将DNA溶液转移至新的离心管中，保存于-20℃，长期保存需放置于-80℃。

二、半自动化提取操作方法

配套自动化仪器使用，以杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪为例（如要配套其他主流品牌自动化仪器使用，程序可向上海金畔生物科技有限公司获取）：

1. 样本处理

1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本，可用1×PBS（pH7.4，无Ca和Mg）对样本进行适当比例稀释后提取（对样本进行稀释是为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围之内，通常可考虑进行100倍稀释）。

1.2 待测样本为干粉的，可用超纯水将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。

1.3 待测样本为复杂背景基质的，可根据需要进行加标回收实验，以确定合适的样本稀释倍数。

2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，涡旋混匀10 sec。

【注】：样本蛋白浓度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量为10 μL；样本蛋白浓度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量为20 μL。

3. 60℃孵育20 min，即为预处理样本，待用。

4. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂（以杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪为例）：

板的名称	位置	试剂名称	用量/孔
样品处理板	V1	预处理样本	200 µL
		结合液	400 µL
		糖原	9 µL
		Poly A钾盐	6 µL
漂洗板	V2	洗涤液A*	500 µL
洗涤板/磁珠板	V3	磁珠悬浮液	20 µL
		洗涤液B*	500 µL
洗脱板	V6	洗脱液	50-100 µL

【注】：磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀，在一次性加样4-5次后，建议再次混匀后再行加样。

5. 按照提取仪的位置，正确安放上述96孔预装板，并放置96深孔磁棒套。

6. 运行如下程序，程序结束后，将洗脱液转移至新的离心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。

奥盛Auto-Pure32A的提取仪器的提取程序

步骤	孔位	混合时间(min)	吸磁时间(sec)	等待时间(min)	容积(μL)	混合速度(1-10)	温度(℃)	混合位置(0-100%)	混合幅度(1-100%)	吸磁位置(0-100%)	吸磁速度(1-10)
移磁珠	3	0.2	60	0	500	5	/	0	80	0	1
结合	1	15	90	0	600	5	/	0	80	0	1
清洗1	2	1	60	0	500	8	/	0	80	0	1
清洗2	3	1	60	4	500	8	/	0	80	0	1
洗脱	6	8	90	0	100	10	65	0	80	0	1
弃磁珠	3	0.2	0	0	500	5	/	0	80	0	1

HB220518