RIPA蛋白裂解液 RIPA裂解液(强)|RIPA lysis buffer(strong)

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RIPA蛋白裂解液 RIPA裂解液(强)|RIPA lysis buffer(strong)

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产品描述

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液（强），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

注意事项

1）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（Cat NO.20201JP76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用说明

一、培养细胞样品

1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。细胞充分裂解后应无没有明显的细胞沉淀。

悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成0.5-1×106个细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。

 

二、组织样品

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

3. 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

【注】RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

 

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产品名称

货号

规格

RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（强）

20101JP60

100 mL

RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱）

20114JP60

100 mL

RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中）

20115JP60

100 mL

Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液

20118JP60

100 mL

NP-40 (Nonidet P 40) 乙基苯基聚乙二醇

20103JP60

100 mL

Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 十二烷基硫酸钠（molecular biology）

20106JP76

500 g

Triton X-100, Molecular Biology Grade 曲拉通X-100（分子生物学级）

20107JP76

500 mL

Triton X-114, Molecular Biology Grade  曲拉通X-114（分子生物学级）

20108JP76

500 mL

 HB200710

Q：该 RIPA 裂解液的裂解程度？

A：胞膜、胞浆、胞核成分均强裂解。

Q：该裂解液的主要应用在哪些实验？

A：WB、IP。

Q：该裂解液会降解蛋白吗？

A：主要成分为 1% Triton X-100，1% deoxycholate，0.1% SDS，均为蛋白抑制剂， 可有效抑制蛋白降解。

Q：使用完该产品后，裂解产物中出现一小团透明胶状物，这是什么原因？如何去除？

A：RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA 等复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白， 则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心，取上清用于后续实验。

[1] Fang DD, Tang Q, Kong Y, et al. MDM2 inhibitor APG-115 synergizes with PD-1 blockade through enhancing antitumor immunity in the tumor microenvironment. J Immunother Cancer. 2019;7(1):327. Published 2019 Nov 28. doi:10.1186/s40425-019-0750-6(IF:8.728)
[2] Tang L, Zhang C, Lu L, et al. Melatonin Maintains Inner Blood-Retinal Barrier by Regulating Microglia via Inhibition of PI3K/Akt/Stat3/NF-κB Signaling Pathways in Experimental Diabetic Retinopathy. Front Immunol. 2022;13:831660. Published 2022 Mar 15. doi:10.3389/fimmu.2022.831660(IF:7.561)
[3] Xie H, Zhang C, Liu D, et al. Erythropoietin protects the inner blood-retinal barrier by inhibiting microglia phagocytosis via Src/Akt/cofilin signalling in experimental diabetic retinopathy. Diabetologia. 2021;64(1):211-225. doi:10.1007/s00125-020-05299-x(IF:7.518)
[4] Yuan J, Jiang X, Lan H, et al. Multi-Omics Analysis of the Therapeutic Value of MAL2 Based on Data Mining in Human Cancers. Front Cell Dev Biol. 2022;9:736649. Published 2022 Jan 17. doi:10.3389/fcell.2021.736649(IF:6.684)
[5] Bu S, Wang Q, Sun J, Li X, Gu T, Lai D. Melatonin suppresses chronic restraint stress-mediated metastasis of epithelial ovarian cancer via NE/AKT/β-catenin/SLUG axis [published correction appears in Cell Death Dis. 2020 Sep 8;11(9):726]. Cell Death Dis. 2020;11(8):644. Published 2020 Aug 18. doi:10.1038/s41419-020-02906-y(IF:6.304)
[6] Kang D, Liu Y, Song Y, Fang B, Zhang Q, Hu L. Triptolide Shows High Sensitivity and Low Toxicity Against Acute Myeloid Leukemia Cell Lines Through Inhibiting WSTF-RNAPII Complex. Front Oncol. 2022;12:811850. Published 2022 Feb 16. doi:10.3389/fonc.2022.811850(IF:6.244)
[7] Li D, Ding J, Liu TL, et al. SARS-CoV-2 receptor binding domain radio-probe: a non-invasive approach for angiotensin-converting enzyme 2 mapping in mice [published correction appears in Acta Pharmacol Sin. 2022 Feb 3;:]. Acta Pharmacol Sin. 2022;43(7):1749-1757. doi:10.1038/s41401-021-00809-y(IF:6.150)
[8] Zeng Y, Zheng Y, Zhang T, et al. Identification of a Subtype-Selective Allosteric Inhibitor of GluN1/GluN3 NMDA Receptors. Front Pharmacol. 2022;13:888308. Published 2022 Jun 9. doi:10.3389/fphar.2022.888308(IF:5.988)
[9] Zhang S, Zhang F, Chen Q, Wan C, Xiong J, Xu J. CRISPR/Cas9-mediated knockout of NSD1 suppresses the hepatocellular carcinoma development via the NSD1/H3/Wnt10b signaling pathway. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):467. Published 2019 Nov 14. doi:10.1186/s13046-019-1462-y(IF:5.646)
[10] Cai T, Wang X, Li B, Xiong F, Wu H, Yang X. Deciphering the synergistic network regulation of active components from SiNiSan against irritable bowel syndrome via a comprehensive strategy: Combined effects of synephrine, paeoniflorin and naringin. Phytomedicine. 2021;86:153527. doi:10.1016/j.phymed.2021.153527(IF:5.340)
[11] Gao X, Fan W, Tan L, et al. Soy isoflavones ameliorate experimental colitis by targeting ERα/NLRP3 inflammasome pathways. J Nutr Biochem. 2020;83:108438. doi:10.1016/j.jnutbio.2020.108438(IF:4.873)
[12] Zhang Y, Fang Z, Guo X, et al. lncRNA B4GALT1-AS1 promotes colon cancer cell stemness and migration by recruiting YAP to the nucleus and enhancing YAP transcriptional activity. J Cell Physiol. 2019;234(10):18524-18534. doi:10.1002/jcp.28489(IF:4.522)
[13] Zhang K, Yang R, Chen J, et al. Let-7i-5p Regulation of Cell Morphology and Migration Through Distinct Signaling Pathways in Normal and Pathogenic Urethral Fibroblasts. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:428. Published 2020 May 14. doi:10.3389/fbioe.2020.00428(IF:3.644)
[14] Zhang Y, Hong Y, Wang D, et al. Hsa_circ_0076305 induces migration-proliferation dichotomy in gastric cancer. Oncol Lett. 2021;21(3):220. doi:10.3892/ol.2021.12481(IF:2.967)
[15] Jian W, Deng XC, Munankarmy A, et al. KIF23 promotes triple negative breast cancer through activating epithelial-mesenchymal transition. Gland Surg. 2021;10(6):1941-1950. doi:10.21037/gs-21-19(IF:2.953)
[16] Qian WH, Liu YY, Li X, Pan Y. MicroRNA-141 ameliorates alcoholic hepatitis‑induced intestinal injury and intestinal endotoxemia partially via a TLR4-dependent mechanism. Int J Mol Med. 2019;44(2):569-581. doi:10.3892/ijmm.2019.4221(IF:2.928)
[17] Wang N, Zeng GZ, Yin JL, Bian ZX. Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt's Lymphoma. Biochem Biophys Res Commun. 2019;519(3):533-539. doi:10.1016/j.bbrc.2019.09.023(IF:2.705)
[18] Zhong J, Lin R, Wang G, Lin L, Ruan S, Liu W. KCNIP3 silence promotes proliferation and epithelial-mesenchymal transition of papillary thyroid carcinoma through activating Wnt/β-catenin pathway. Tissue Cell. 2022;75:101739. doi:10.1016/j.tice.2022.101739(IF:2.466)
[19] Qiu ZH, He J, Chai TC, et al. miR-145 attenuates phenotypic transformation of aortic vascular smooth muscle cells to prevent aortic dissection. J Clin Lab Anal. 2021;35(12):e23773. doi:10.1002/jcla.23773(IF:2.352)
[20] Wu J, Li L, Wang Y, Ren X, Lin K, He Y. The HSP90/Akt pathway may mediate artemether-induced apoptosis of Cal27 cells. FEBS Open Bio. 2019;9(10):1726-1733. doi:10.1002/2211-5463.12711(IF:1.959)
[21] Zhang C, Cao C, Liu XL, Jun T, Liu P. Cul4b Promotes Progression of Malignant Cutaneous Melanoma Patients by Regulating CDKN2A. Tohoku J Exp Med. 2021;254(1):33-39. doi:10.1620/tjem.254.33(IF:1.848)

产品描述

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液（强），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

注意事项

1）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（Cat NO.20201JP76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用说明

一、培养细胞样品

1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。细胞充分裂解后应无没有明显的细胞沉淀。

悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成0.5-1×106个细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。

 

二、组织样品

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

3. 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

【注】RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

 

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Q：该 RIPA 裂解液的裂解程度？

A：胞膜、胞浆、胞核成分均强裂解。

Q：该裂解液的主要应用在哪些实验？

A：WB、IP。

Q：该裂解液会降解蛋白吗？

A：主要成分为 1% Triton X-100，1% deoxycholate，0.1% SDS，均为蛋白抑制剂， 可有效抑制蛋白降解。

Q：使用完该产品后，裂解产物中出现一小团透明胶状物，这是什么原因？如何去除？

A：RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA 等复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白， 则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心，取上清用于后续实验。

[1] Fang DD, Tang Q, Kong Y, et al. MDM2 inhibitor APG-115 synergizes with PD-1 blockade through enhancing antitumor immunity in the tumor microenvironment. J Immunother Cancer. 2019;7(1):327. Published 2019 Nov 28. doi:10.1186/s40425-019-0750-6(IF:8.728)
[2] Tang L, Zhang C, Lu L, et al. Melatonin Maintains Inner Blood-Retinal Barrier by Regulating Microglia via Inhibition of PI3K/Akt/Stat3/NF-κB Signaling Pathways in Experimental Diabetic Retinopathy. Front Immunol. 2022;13:831660. Published 2022 Mar 15. doi:10.3389/fimmu.2022.831660(IF:7.561)
[3] Xie H, Zhang C, Liu D, et al. Erythropoietin protects the inner blood-retinal barrier by inhibiting microglia phagocytosis via Src/Akt/cofilin signalling in experimental diabetic retinopathy. Diabetologia. 2021;64(1):211-225. doi:10.1007/s00125-020-05299-x(IF:7.518)
[4] Yuan J, Jiang X, Lan H, et al. Multi-Omics Analysis of the Therapeutic Value of MAL2 Based on Data Mining in Human Cancers. Front Cell Dev Biol. 2022;9:736649. Published 2022 Jan 17. doi:10.3389/fcell.2021.736649(IF:6.684)
[5] Bu S, Wang Q, Sun J, Li X, Gu T, Lai D. Melatonin suppresses chronic restraint stress-mediated metastasis of epithelial ovarian cancer via NE/AKT/β-catenin/SLUG axis [published correction appears in Cell Death Dis. 2020 Sep 8;11(9):726]. Cell Death Dis. 2020;11(8):644. Published 2020 Aug 18. doi:10.1038/s41419-020-02906-y(IF:6.304)
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[8] Zeng Y, Zheng Y, Zhang T, et al. Identification of a Subtype-Selective Allosteric Inhibitor of GluN1/GluN3 NMDA Receptors. Front Pharmacol. 2022;13:888308. Published 2022 Jun 9. doi:10.3389/fphar.2022.888308(IF:5.988)
[9] Zhang S, Zhang F, Chen Q, Wan C, Xiong J, Xu J. CRISPR/Cas9-mediated knockout of NSD1 suppresses the hepatocellular carcinoma development via the NSD1/H3/Wnt10b signaling pathway. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):467. Published 2019 Nov 14. doi:10.1186/s13046-019-1462-y(IF:5.646)
[10] Cai T, Wang X, Li B, Xiong F, Wu H, Yang X. Deciphering the synergistic network regulation of active components from SiNiSan against irritable bowel syndrome via a comprehensive strategy: Combined effects of synephrine, paeoniflorin and naringin. Phytomedicine. 2021;86:153527. doi:10.1016/j.phymed.2021.153527(IF:5.340)
[11] Gao X, Fan W, Tan L, et al. Soy isoflavones ameliorate experimental colitis by targeting ERα/NLRP3 inflammasome pathways. J Nutr Biochem. 2020;83:108438. doi:10.1016/j.jnutbio.2020.108438(IF:4.873)
[12] Zhang Y, Fang Z, Guo X, et al. lncRNA B4GALT1-AS1 promotes colon cancer cell stemness and migration by recruiting YAP to the nucleus and enhancing YAP transcriptional activity. J Cell Physiol. 2019;234(10):18524-18534. doi:10.1002/jcp.28489(IF:4.522)
[13] Zhang K, Yang R, Chen J, et al. Let-7i-5p Regulation of Cell Morphology and Migration Through Distinct Signaling Pathways in Normal and Pathogenic Urethral Fibroblasts. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:428. Published 2020 May 14. doi:10.3389/fbioe.2020.00428(IF:3.644)
[14] Zhang Y, Hong Y, Wang D, et al. Hsa_circ_0076305 induces migration-proliferation dichotomy in gastric cancer. Oncol Lett. 2021;21(3):220. doi:10.3892/ol.2021.12481(IF:2.967)
[15] Jian W, Deng XC, Munankarmy A, et al. KIF23 promotes triple negative breast cancer through activating epithelial-mesenchymal transition. Gland Surg. 2021;10(6):1941-1950. doi:10.21037/gs-21-19(IF:2.953)
[16] Qian WH, Liu YY, Li X, Pan Y. MicroRNA-141 ameliorates alcoholic hepatitis‑induced intestinal injury and intestinal endotoxemia partially via a TLR4-dependent mechanism. Int J Mol Med. 2019;44(2):569-581. doi:10.3892/ijmm.2019.4221(IF:2.928)
[17] Wang N, Zeng GZ, Yin JL, Bian ZX. Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt's Lymphoma. Biochem Biophys Res Commun. 2019;519(3):533-539. doi:10.1016/j.bbrc.2019.09.023(IF:2.705)
[18] Zhong J, Lin R, Wang G, Lin L, Ruan S, Liu W. KCNIP3 silence promotes proliferation and epithelial-mesenchymal transition of papillary thyroid carcinoma through activating Wnt/β-catenin pathway. Tissue Cell. 2022;75:101739. doi:10.1016/j.tice.2022.101739(IF:2.466)
[19] Qiu ZH, He J, Chai TC, et al. miR-145 attenuates phenotypic transformation of aortic vascular smooth muscle cells to prevent aortic dissection. J Clin Lab Anal. 2021;35(12):e23773. doi:10.1002/jcla.23773(IF:2.352)
[20] Wu J, Li L, Wang Y, Ren X, Lin K, He Y. The HSP90/Akt pathway may mediate artemether-induced apoptosis of Cal27 cells. FEBS Open Bio. 2019;9(10):1726-1733. doi:10.1002/2211-5463.12711(IF:1.959)
[21] Zhang C, Cao C, Liu XL, Jun T, Liu P. Cul4b Promotes Progression of Malignant Cutaneous Melanoma Patients by Regulating CDKN2A. Tohoku J Exp Med. 2021;254(1):33-39. doi:10.1620/tjem.254.33(IF:1.848)