Cygnus产品及应用选择指南

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Cygnus产品及应用选择指南

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       部分药品来源于生物组织，但产量有限，所以其价格十分昂贵。微生物/细胞生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。利用基因工程将合成相应药物成分的基因导入细胞内，让其产生相应的药物，不但能解决产量问题，还能大大降低生产成本。

                                           基因工程图

                      

 

        基因工程大大改变了现有制药生产的状况，但是基因工程产品中残留的宿主细胞蛋白是影响制品纯度的重要因素,反复使用含宿主细胞蛋白的基因工程制品有可能引起机体的过敏反应。目前应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程主要采用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为宿主细胞。因制品中细胞蛋白残留量低 ,用常规的理化方法无法检测,为此需要建立细胞蛋白残留量测定方法,对半成品进行检定,从而更有效地保证制品的质量 ,提高制品的安全性。

        Cygnus technologies, Inc.是美国一家专门从事生物工程和制药过程中残留物检测的一系列产品。生物制品生产过程中存在许多影响产品质量的残留物，诸如特殊重组表达系统中宿主细胞蛋白（ Host Cell protein, HCP ）的残留以及生物制品加工过程中培养物残留的污染物。公司提供了广泛而灵敏度*的一系列用于检测生物工程残留物的产品，

        Cygnus公司检测产品覆盖了常用于基因工程的培养细胞以及一些用于细胞培养的添加物。CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary），该细胞具有不死性，可以传代百代以上，是目前生物工程上广泛培养的细胞。*批准应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程产品约有三十多种，其中只有一种（乙肝疫苗）是由酵母菌生产的，其余所有产品都是由CHO细胞和大肠杆菌生产的，大肠杆菌不能形成有活性的二聚体（如白介素2），也不具有糖基化的功能（如EPO），而CHO却具有如上的功能，因此CHO成为表达复杂生物大分子的理想宿主。另外CH0细胞在基因工程使用中还有一个优点，该细胞属于成纤维细胞（fibroblast），是一种非分泌型细胞，它本身很少分泌CHO内源蛋白，因而检测起来很困难。

 

一、     Cygnus Elisa检测产品

        共有39种Elisa 检测试剂盒，包括原核、真核表达细胞宿主蛋白检测试剂盒，细胞培养残留物检测试剂盒等。

公司产品：

 货号  货名
 F015  CHO HCP ELISA kit（中国仓鼠卵巢细胞）
 F410

 E.coli HCP ELISA Kit（大肠杆菌）
 F140  Pichia pastoris HCP ELISA Kit（毕赤酵母）
 F030  BSA ELISA kit
 F050  Protein A ELISA kit
 F050H  Protein A-h ELISA kit （human IgG）
 F400  Protein A ELISA kit

 

1.CHO HCP ELISA kit（F015）

zui常用的用于检测中国仓鼠卵巢细胞宿主蛋白试剂盒。

1）CHO HCP ELISA kit（F015）盒子组成

 

2）操作流程（中文操作流程仅供参考，实验请参照原装英文说明书）

客户可以根据检测灵敏度的需要，选择其中一种检测方法。

 

两种操作方法的比较：

   Rapid protocol   High sensitivity protocol
 标准品  0,4,20,75,250ng/ml  0,1,4,20,75ng/ml
 检测耗时  2+1.5=3.5h  2+2+1.5=5.5h
 灵敏度  2 ng/ml   <500pg/ml

 

2. E.coli HCP ELISA kit（F410）

针对利用E.coli生产相关药物的客户，检测大肠杆菌宿主蛋白残留物的利器。

1）E.coli HCP ELISA kit（F410）盒子组成

2）操作流程（中文操作流程仅供参考，实验请参照原装英文说明书）

 

 

3. Pichia pastoris HCP ELISA kit（F140）

真核表达系统（毕赤酵母）宿主细胞残留物检测试剂盒。

1）Pichia pastoris HCP ELISA kit盒子组成

 

2）两种不同的操作流程

 

两种操作方法的比较：

   Rapid protocol  Standard protocol
 标准品  0,4,20,75,250ng/ml  0,1,4,20,75ng/ml
 检测耗时（h）  1+0.5=1.5  3+0.5=3.5
 灵敏度  <75 ng/ml  <0.3 ng/ml

 

4. BSA ELISA kit （F030）

细胞培养添加物BSA的检测试剂盒。

1）BSA ELISA kit （F030）盒子组成

 

2）操作步骤

 

5. Protein A的检测试剂盒

针对开发抗体药，检测纯化过程中残留的Protein A，也有其他相关应用，分为三款F050、F050H和F400，其中F400是产品，是灵敏度zui高、效果的检测Protein A的试剂盒。

1）三个试剂盒的组成

 

 

2）三个试剂盒的差别

 货号  标记系统  底物  灵敏度  检测对象  处理步骤
 F050  生物素，

AP偶联的抗体

  PNPP  120pg/mL  重组的Protein A  无热处理
 F050H  

生物素，

AP偶联的抗体

  PNPP  100pg/mL  人源化的Protein A  热处理
 F400  HRP  TMB  50pg/mL  重组修饰的Protein A  热处理

 

二、Cygnus WB检测产品

        WB也是检测宿主细胞蛋白的手段，Cygnus的WB kits里的抗体跟相应的Elisa Kits是一样的，WB kits里面包括酶标抗体、阳性抗原、酶底物和封闭浓缩液，Cygnus的WB产品共有11种。具体产品可以参照下列（http://www.cygnustechnologies.com/category/western-blot-kits.html

）

部分WB产品：

 货号  品名  种属性  对应的Elisa
 F415  E.coli HCP WB kit  Bacterial  F410
 F145  Pichia pastoris HCP WB kit  Yeast  F140
 F185  SP2/0 HCP WB kit  Mammalian  F180
 F060  CHO HCP WB kit  Mammalian  F015

 

三、 Cygnus免疫学产品

       免疫学产品全部是Elisa和WB盒子里面的相关产品，提供抗体、抗原浓缩液（对照/标准品）、缓冲液和洗涤液等。

       大部分抗体为山羊和兔来源，偶有猪抗，抗体货号有前后缀，不同后缀代表的意思不同。Cygnus抗体共有117种，众多抗体产品参照下列*：http://www.cygnustechnologies.com/category/antibodies.html

抗体的前缀/后缀代表的意义：

       PA或者PG是IgG片段

       AF是亲和纯化的抗体

       AF-AP偶联了AP的亲和纯化抗体

       AF-B偶联了生物素的亲和纯化抗体

       AF-HRP是偶联了HRP的亲和纯化抗体

下面为部分抗体产品：

货号   货名  类型

规格
 A549  anti-A549 HCP  Goat, neat serum  1 ml
 A549-AF  anti-A549 HCP  Goat, affinity purified  1 mg
 A549-PA  anti-A549 HCP  Goat, IgG fraction

 1 ml
 C0016AF-HRP  anti-CHO HCP  Goat , affinity purified:HRP  1 mg
 C0016  anti-CHO HCP  Goat, neat serum  1 ml
 AP117  anti-E.coli HCP  Goat, affinity purified  1 mg
 AF117B  anti-E.coli HCP  Goat,affinity purified:biotinylated  1 mg
 PI-49  anti-P. pastoris HCP  Goat, neat serum  1 ml
 PI-49AF-AP  anti-P. pastoris HCP  Goat,affinity purifed:alkaline phosphatase labeled  1 ml