DNA甲基化与基因表达和基因功能密切相关，高效、准确地检测DNA甲基化对于生物学、遗传学、病理学、药理学、医疗诊断等多方面研究已经变得越发重要。最常用的检测DNA甲基化的方法是亚硫酸氢盐转化法。亚硫酸氢盐能转化未发生甲基化的胞嘧啶，通过脱氨基反应产生尿嘧啶磺酸盐，发生甲基化的胞嘧啶则不会被亚硫酸氢盐转化。转化后的DNA经过高效吸附核酸的磁珠结合，再通过洗涤、脱硫和洗脱等步骤富集得到磁珠上的DNA。

本试剂盒将DNA变性与亚硫酸氢盐转化合并为一步，转化反应时间需2.5 h；DNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99.5%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。

 

组分信息

类别	组分编号	组分名称	12223ES10	12223ES50	12223ES70
Part Ⅰ	12223-A	转化液	1.2 mL×1	1.2 mL×5	1.2 mL×20
Part Ⅱ	12223–B	结合液	6.5 mL	32 mL	122 mL
	12223–C	脱硫液	2.2 mL	12 mL	42 mL
	12223-D	洗涤液	2.5 mL	12.5 mL	50 mL
	12223–E	洗脱液	1 mL	5 mL	20 mL
	12223–F	磁珠悬浮液	0.12 mL	0.6 mL	1.3 mL×2

注：10T：使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入10 mL无水乙醇

50T：使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入50 mL无水乙醇

200T：使用前洗涤液(12223-D)每瓶需加入200 mL无水乙醇

 

储存条件

Part Ⅰ组分2~8℃保存；Part Ⅱ组分常温保存。有效期12个月。

 

使用说明

手动操作说明

1. 转化

1. 取出110 μL转化液于200 μL PCR管(八连管)中，加入40 μL DNA样本（若不足40 μL可用水补足），盖上管盖后，震荡混匀，瞬时离心，管盖上不要残留液体。
2. 将PCR管（八连管）放入PCR仪，执行如下程序：

温度	时间
热盖105 ℃	On
98 ℃	10 min
64 ℃	2.5 h
4 ℃	不超过20h

2. 纯化

1. 转移转化后的DNA溶液到1.5 mL离心管中，加入600 μL结合液和10 μL磁珠， 1300~1500 rpm振荡30s；
2. 室温孵育5 min后置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清，使用枪头小心吸弃上清；
3. 向离心管中加入400 μL洗涤液，1300~1500 rpm振荡30 s，置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清，轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落，瞬离，吸弃上清液；
4. 向离心管中加入200 μL脱硫液，1300~1500 rpm振荡30 s，室温孵育15 min，置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清，轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落，瞬离，吸弃上清液；
5. 向离心管中加入400 μL洗涤液，1300~1500 rpm振荡30 s，置于磁力架上进行磁分离至溶液完全澄清，轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落，瞬离，吸弃上清液，重复本步骤一次；
6. 将离心管转移至55 ℃金属浴孵育5~10 min，将磁珠完全晾干；

【注】：此步骤非常关键，请务必保证完全干透但磁珠不干裂！

7. 加入35 μL左右洗脱液到磁珠中，1300~1500 rpm振荡30 s将磁珠重悬于洗脱液中，金属浴55 ℃加热5 min后置于磁力架上进行磁分离，回收上清液（即转化后的DNA溶液）；

【注】：ddH₂O也可进行洗脱；洗脱体积可根据实验需求相应调整。

8. 洗脱的DNA溶液可以直接用于下游反应，或者保存于-20 ℃备用。

 

注意事项

1. 转化液避免反复开盖，多次开盖可能影响转化效果，开盖使用后立即拧紧瓶盖。

2. 洗涤液首次使用时，需按标签注明的体积添加无水乙醇。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取洗脱液时应尽量避免吸入磁珠。

4. 磁珠使用前需要用涡旋混匀器振荡混匀。

5. 需自备无水乙醇

6. 本产品仅作科研用途。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

产品性能