海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG129M)

海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液

产品编号: RG129M

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RG129S 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10ml 39.00元
RG129M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 100ml 211.00元

碧云天生产的海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液(Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Cell Lysis Buffer),是一种用于裂解细胞后用于海肾萤光素酶报告基因检测的裂解液。本产品裂解后的细胞样品,可以用于RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒、RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒或RG016/RG017海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒。本产品制备的样品不适合用于萤火虫萤光素酶报告基因的检测。
本裂解液兼容的产品列表如下:

产品编号 产品名称 包装
RG016 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
RG017 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次

如果细胞量比较大,例如培养在培养皿或6孔板中时,适合使用本产品先裂解细胞,然后再使用RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒或RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒进行检测。
使用RG016/RG017海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒时,如果试剂盒中的裂解液用量不足,可以使用本产品。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG129S 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10ml
RG129M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 100ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,至少一年有效。4℃保存至少1个月有效。
注意事项:
本产品裂解后的样品不能直接用于萤火虫萤光素酶报告基因的检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 融解本产品并适当混匀,置于冰浴备用。
2. 细胞的裂解和样品的收集:
a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

  注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100μl。
b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于海肾萤光素酶报告基因检测。
  注1:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
  注2:制备的样品也可以用BCA法测定蛋白浓度,然后用于SDS-PAGE和Western blot检测。
3. 组织的裂解和样品的收集:
a. 对于海肾萤光素酶转基因动物等组织样品的裂解,优先推荐先把组织样品液氮冷冻研磨成粉末后,按照组织重量和裂解液体积1:10的比例进行裂解(例如20mg组织粉末加入200μl海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液进行裂解);也可以按照组织重量和裂解液体积1:10的比例进行匀浆(例如20mg组织加入200μl海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液用玻璃匀浆器或者电动匀浆器进行匀浆)。
b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于海肾萤光素酶报告基因检测。
  注1:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
  注2:制备的样品也可以用BCA法测定蛋白浓度,然后用于SDS-PAGE和Western blot检测。
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产品编号 产品名称 包装
C0508 磷酸钙法细胞转染试剂盒 >200次
C0526-0.5ml Lipo6000™转染试剂 0.5ml
C0526-1.5ml Lipo6000™转染试剂 1.5ml
C0526-7.5ml Lipo6000™转染试剂 5×1.5ml
D2102-1μg pGL6 (报告基因质粒) 1μg
D2105-1μg pGL6-TA (报告基因质粒) 1μg
D2106-1μg pGL6-miR (报告基因质粒) 1μg
D2762-1μg pRL-SV40-N (报告基因质粒) 1μg
D2768-1μg pRL-SV40-C (报告基因质粒) 1μg
FCP966-80pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP966-320pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱
FCP968-80pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP968-320pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱
RG005 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
RG006 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
RG016 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
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RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
RG051S/M Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG055S/M One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG058S/M Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG129S/M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG129M)

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One-Lumi萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG055M)

One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

产品编号: RG055M

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RG055S One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次 487.00元
RG055M One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次 2822.00元

碧云天生产的One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(One-Lumi™ Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit,One-Lumi™ Firefly Luciferase Assay Kit),简称One-Lumi,是一种无需洗涤或收集细胞的通过化学发光法直接测定细胞内萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的高灵敏度、高信号稳定性的一步法检测试剂盒。
本产品是One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称One-Lumi II,产品编号为RG056)的不同包装版本,两者的检测效果完全一致。本产品,即One-Lumi为即用型液体,其优点是无需配制即可以直接使用,但需要-80℃保存,如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。One-Lumi II,为One-Lumi的冻干粉版本,优点是在-20℃保存非常稳定,缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。
本试剂盒提供的One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂,按照与培养液等体积的比例加入到细胞培养板内反应5分钟,即可进行化学发光检测。本试剂盒使用灵活便捷、检测灵敏度高、发光信号稳定、测定样品的线性范围宽,性能优于国外主要同类产品。另外,本产品也可以用于裂解并收集保存的细胞样品的检测。
本产品的性能优于国外主要同类产品。本产品的用途与碧云天的同类产品Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称Bright-Lumi)、Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称Steady-Lumi)及Promega公司的One-Glo™ Luciferase Assay System (简称One-Glo)基本相同,本产品的检测灵敏度稍弱于Bright-Lumi,但显著优于Steady-Lumi和国外同类产品(Competitor P) (图1A、C),发光强度比国外同类产品(Competitor P)提高了约40%;化学发光信号的稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B),显著优于Bright-Lumi,稍弱于Steady-Lumi (图1D)。本产品与Bright-Lumi、Steady-Lumi和国外同类产品(Competitor  P)的检测效果比较参见图1。
本产品发光强度高。对于相同的细胞样品,本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)强约25-70% (图1A),比Steady-Lumi强约2-6倍(图1C),实测效果可能会因细胞种类、检测环境等的不同有所差异。

One-Lumi萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG055M)

图1. One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(One-Lumi)和碧云天的同类产品Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Bright-Lumi)、Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Steady-Lumi)及国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞的检测效果。图A和图B为One-Lumi和Competitor P的化学发光强度和化学发光稳定性的检测效果对比图,图C和图D为One-Lumi和Bright-Lumi、Steady-Lumi的化学发光强度和化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品的检测灵敏度高,测定样品的线性范围宽。96孔板中,通常本产品可以在20万个细胞范围内呈现良好的线性关系。不同的细胞、不同的萤光素酶表达水平的检测细胞数量的上限可能有所差异,当萤火虫萤光素酶表达水平很高时,可能只在10万个细胞范围有良好的线性关系,但是化学发光读数还是会随着细胞数量的增加而继续升高的。本产品对转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果参见图2。

One-Lumi萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG055M)

图2. 本产品对转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果。根据共转的EGFP表达质粒,实测转染效率约为60-70%。实际读数会因细胞种类、转染效率、所用报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,完成检测仅需约10分钟。本产品比其它萤光素酶测定方法更加简单快捷,细胞可以在同一块多孔板中培养和检测,无需洗涤细胞,也无需更换或去除培养液,只需把试剂盒提供的One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂与培养的细胞等体积混合,反应5分钟后即可进行化学发光检测。并且产生的化学发光信号十分稳定,在反应开始60分钟后仍可保留60%以上的信号。使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测。
本产品稳定性好。One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂稳定性非常好,反复冻融5次对检测效果无明显影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%。本产品4℃条件下,保存3天检测效果下降不到20%,保存5天检测效果下降不超过30%,保存7天仍可保留65%以上的检测效果。室温保存1天可保留70%以上的检测效果,室温保存3天可保留60%以上的检测效果,37℃保存1天可保留60%以上的检测效果。本产品即使仅保留约50%的检测效果,仍可以满足各种常规检测。
本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测(high-throughput screening)。本产品不仅可以等体积加入到细胞培养孔中进行直接检测,也可以先使用RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液裂解并收集细胞后再用本产品进行检测。
本产品兼容性强。本产品兼容各种常见培养液,正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇对信号和稳定性基本没有影响,常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。
萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出波长为560nm左右的生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物等处理对目的基因的转录调控作用。本试剂盒的检测原理参考图3。

One-Lumi萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG055M)

图3. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

碧云天的三款一步法萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒的主要特点和差异如下。如果希望发光信号比较强,并在30分钟内即可进行检测,推荐使用Bright-Lumi;如果对信号稳定性要求特别高,需要批量或连续操作,推荐使用Steady-Lumi;如果对发光信号和稳定性都有要求,推荐使用One-Lumi。

产品编号 RG051S/M RG055S/M RG056S/M RG058S/M
产品简称 Bright-Lumi One-Lumi One-Lumi II Steady-Lumis
使用便捷性 非常方便 非常方便 方便 非常方便
检测灵敏度 特别灵敏 非常灵敏 非常灵敏 较灵敏
信号强度 非常高 较高 较高
信号半衰期 0.5-1小时 1-2小时 1-2小时 5-6小时
产品稳定性 非常稳定 非常稳定 特别稳定 非常稳定
线性范围(细胞数) 50个-10万个 50个-10万个 50个-10万个 50个-20万个
推荐指数 ★★★★★ ★★★★ ★★★★ ★★★★

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
对于96孔板,推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板,推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然我们有检测数据显示适当减少检测试剂的用量很可能仍然会得到较好的检测结果,但对于细胞数量偏多、细胞数量特别少或者重复性要求比较高的情况,建议按照推荐用量进行检测。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG055S One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂 10ml
RG055M One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂 100ml
说明书 1份

保存条件:
-80℃避光保存,至少一年有效;-20℃避光保存,推荐3-6个月内使用。
注意事项:
本产品在-20℃保存其检测效果会逐渐下降,保存半年后其发光效果会降低约50%。因此,本产品如果保存于-20℃,推荐在3-6个月内使用。如果订购后可能放置较长时间后再使用,推荐订购在-20℃保存非常稳定的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂盒(RG056)。
由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细胞和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测试剂在室温或不超过25°C的水浴中融解并混匀后使用。
尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,为保证本产品的稳定性、取得良好的使用效果,第一次解冻后可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
请使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。
待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。
为避免细胞转染效率的差异而带来的误差,如果有必要,可以同时转染海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参,采用碧云天的Dual-Lumi™/Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG088S/RG088M/RG089S/RG089M)进行检测。
如果希望先裂解并收集细胞样品,然后再使用本试剂盒进行检测,须单独采购RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。其它裂解液未经测试。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 细胞的准备:
使用适合进行化学发光检测的96孔板,每孔接种100μl细胞(如使用384孔板,每孔接种25μl细胞,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养和细胞转染的常规方法培养和转染细胞。如有需要,可加入药物处理细胞。
2. 检测试剂的准备:
融解冻存的One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂,按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量,取适量One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂,平衡至室温。
3. 萤光素酶检测:
a. 取出细胞培养板在室温平衡10分钟(通常不宜超过30分钟)。
b. 96孔板每孔加入100μl One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂(384孔板每孔25μl)。
c. 室温(约25℃)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。
d. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
4. 裂解并收集细胞后的检测(本步骤仅当细胞量比较大的情况下,例如细胞培养在培养皿或6孔板中时,可以考虑采用):
a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
c. 取20μl样品,加入100μl已经融解并平衡至室温的One-Lumi™萤火虫萤光素酶检测试剂,适当混匀。
d. 室温(约25℃)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。注意:如果对于数据的稳定性的要求不太高,可以忽略本步骤,在混匀后立即进行化学发光检测。
e. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

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产品编号 产品名称 包装
C0508 磷酸钙法细胞转染试剂盒 >200次
C0526-0.5ml Lipo6000™转染试剂 0.5ml
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D2768-1μg pRL-SV40-C (报告基因质粒) 1μg
FCP966-80pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP966-320pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱
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One-Lumi萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG055M)

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Steady-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG059M)

Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

产品编号: RG059M

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RG059S Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次 487.00元
RG059M Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次 2822.00元

碧云天生产的Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Steady-Lumi™ II Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit,Steady-Lumi™ II Firefly Luciferase Assay Kit),简称Steady-Lumi II,是一种无需洗涤或收集细胞的通过化学发光法直接测定细胞内萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的高灵敏度、超高信号稳定性的一步法检测试剂盒。
本产品是Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称Steady-Lumi,产品编号为RG058)的不同包装版本,两者的检测效果完全一致。Steady-Lumi为即用型液体,优点是无需配制即可以直接使用,缺点是需要-80℃保存,如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降;本产品,即Steady-Lumi II,为Steady-Lumi的冻干粉版本,使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用,优点是在-20℃保存非常稳定。
配制好的Steady-Lumi II萤火虫萤光素酶检测试剂,按照将与培养液等体积的比例加入到细胞培养板内反应5分钟,即可进行化学发光检测。本试剂盒使用灵活便捷、检测灵敏度高、发光信号特别稳定、测定样品的线性范围宽,信号的半衰期长达5小时,性能优于国外主要同类产品。另外,本产品也可以用于裂解并收集保存的细胞样品的检测。
本产品的性能优于国外主要同类产品。本产品的用途与碧云天的同类产品Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称Bright-Lumi)、One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称One-Lumi)及Promega公司的Steady-Glo™ Luciferase Assay System (简称Steady-Glo)基本相同,但本产品的化学发光的信号稳定性显著优于Bright-Lumi和One-Lumi (图1D),与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B);发光强度比国外同类产品(Competitor P)提高了约40%以上(图1A),但Bright-Lumi和One-Lumi的灵敏度更高(图1C)。本产品与Bright-Lumi、One-Lumi和国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。

Steady-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG059M)

图1. Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Steady-Lumi II)和碧云天的同类产品Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Bright-Lumi)、One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(One-Lumi)及国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞的检测效果。Steady-Lumi II与碧云天生产的Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Steady -Lumi)的检测效果完全一致。图A和图B为Steady-Lumi即Steady-Lumi II和Competitor P的化学发光强度和化学发光稳定性的检测效果对比图,图C和图D为Steady-Lumi即Steady-Lumi II和One-Lumi、Bright-Lumi的化学发光强度和化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品发光信号特别稳定。发光信号在60分钟内波动不超过10%,反应120分钟内信号波动不超过20%,信号半衰期长达5小时之久,在发光稳定性方面显著优于同类产品Bright-Lumi和One-Lumi(图1D),特别适用于96孔板或384孔板中萤火虫萤光素酶活性的大批量测定。
本产品发光强度高。对于相同的细胞样品,本产品的发光效果虽然低于同类产品Bright-Lumi和One-Lumi(图1C),但是比国外同类产品(Competitor P)强约40-100%(图1A),实测效果的差异可能会因细胞种类、检测环境等的不同有所不同。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平非常低时,推荐使用灵敏度更高的Bright-Lumi™/Bright-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG051S/RG051M/RG052S/RG052M)或One-Lumi™/One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG055S/RG055M/RG056S/RG056M)。
本产品的检测灵敏度高,测定样品的线性范围宽。96孔板中,本产品可以在20万个细胞范围内呈现良好的线性关系。不同的细胞、不同的萤光素酶表达水平时的检测细胞数量上限可能有所差异,当萤火虫萤光素酶表达水平非常高时,可能只在10万个细胞范围有良好的线性关系,但是化学发光读数还是会随着细胞数量的增加而继续升高的。本产品对转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果参见图2。

Steady-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG059M)

图2. 本产品对转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果。根据共转的EGFP表达质粒,实测转染效率约为60-70%。实际读数会因细胞种类、转染效率、所用报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,完成整个检测流程仅需约10分钟。本产品比其它萤光素酶测定方法更加简单快捷。细胞可以在同一块多孔板中培养和检测,无需洗涤细胞,也无需更换或去除培养液,只需用试剂盒提供的检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂后,与培养细胞等体积混合,反应10分钟后即可进行化学发光检测。并且产生的化学发光信号非常稳定,信号半衰期长达5小时。使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测。
本产品稳定性好。本产品在-20℃可以长期保存,配制成Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂后的稳定性也比较好,反复冻融5次检测效果下降不超过5%,反复冻融10次检测效果下降不超过15%。Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂在4℃条件下保存3天检测效果下降不到25%,保存5天检测效果下降不超过35%,保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果,室温保存3天可保留50%以上的检测效果,在37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。
本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测(high-throughput screening)。本产品不仅可以等体积加入到细胞培养孔中进行直接检测,也可以先使用RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液裂解并收集细胞后再用本产品进行检测。
本产品兼容性强。本产品兼容各种常见培养液,正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇对信号和稳定性基本没有影响,常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。
萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出波长为560nm左右的生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物等处理对目的基因的转录调控作用。本试剂盒的检测原理参考图3。

Steady-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG059M)
图3. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

碧云天的三款一步法萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒的主要特点和差异如下。如果希望发光信号比较强,并在30分钟内即可进行检测,推荐使用Bright-Lumi;如果对信号稳定性要求特别高,需要批量或连续操作,推荐使用Steady-Lumi;如果对发光信号和稳定性都有要求,推荐使用One-Lumi。

产品编号 RG052S/M RG056S/M RG058S/M RG059S/M
产品简称 Bright-Lumi II One-Lumi II Steady-Lumi Steady-Lumi II
使用便捷性 方便 方便 非常方便 方便
检测灵敏度 特别灵敏 非常灵敏 较灵敏 较灵敏
信号强度 非常高 较高
信号半衰期 0.5-1小时 1-2小时 5-6小时 5-6小时
产品稳定性 特别稳定 特别稳定 非常稳定 特别稳定
线性范围(细胞数) 50个-10万个 50个-10万个 50个-20万个 50个-20万个
推荐指数 ★★★★★ ★★★★ ★★★★ ★★★★

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
对于96孔板,推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板,推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然我们有检测数据显示适当减少检测试剂的用量很可能仍然会得到较好的检测结果,但对于细胞数量偏多、细胞数量特别少或者重复性要求比较高的情况,建议按照推荐用量进行检测。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG059S-1 Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG059S-2 Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测底物 1瓶
说明书 1份
产品编号 产品名称 包装
RG059M-1 Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测缓冲液 100ml
RG059M-2 Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测底物 1瓶
说明书 1份

保存条件:
-20℃避光保存,至少一年有效。检测缓冲液和检测底物混合后配制成的Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂,-80℃避光保存,至少一年有效;-20℃避光保存,推荐3-6个月内使用。
注意事项:
对于订购后可能放置较长时间后再使用的,或者对于检测结果的精度要求特别高的,推荐订购Steady-Lumi™ II;对于订购后短期内使用完毕的,推荐订购使用更加便捷的Steady-Lumi™。
由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细胞和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测缓冲液在室温或不超过25°C的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测试剂使用。
尽管经测试检测缓冲液和检测底物混合后配制成的Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂反复冻融5次对于其检测效果的影响不大,为保证检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果,建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
请使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。
待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。
为避免细胞转染效率的差异而带来的误差,如果有必要,可以同时转染海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参,采用碧云天的Dual-Lumi™/Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG088S/RG088M/RG089S/RG089M)进行检测。
如果希望先裂解并收集细胞样品,然后再使用本试剂盒进行检测,须单独采购RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。其它裂解液未经测试。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.细胞的准备:
使用适合进行化学发光检测的96孔板,每孔接种100μl细胞(如使用384孔板,每孔接种25μl细胞,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养和细胞转染的常规方法培养和转染细胞。如有需要,可加入药物处理细胞。
2.检测试剂的准备:
融解冻存的Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测缓冲液,将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中,旋紧瓶盖后适当颠倒混匀,当检测底物全部溶解并混匀后即为Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂。按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量,取适量Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂,平衡至室温。
注:冻干粉状的Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口,旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底轻轻敲击桌面,使粉末尽量掉落至瓶底,然后再轻轻旋开瓶盖,并注意不要损失冻干粉。
3.萤光素酶检测:
a.取出细胞培养板在室温平衡10分钟(通常不宜超过30分钟)。
b.96孔板每孔加入100μl Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂(384孔板每孔25μl)。
c.室温(约25℃)孵育10分钟,使发光信号趋于稳定。
d.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
4.裂解并收集细胞后的检测(本步骤仅当细胞量比较大的情况下,例如细胞培养在培养皿或6孔板中时,可以考虑采用):
a.对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100μl。
b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
c. 取20μl样品,加入100μl已经平衡至室温的Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂,适当混匀。
d. 室温(约25℃)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。注意:如果对于数据的稳定性的要求不太高,可以忽略本步骤,在混匀后立即进行化学发光检测。
e. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

常见问题:
1.Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2.可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

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Renilla-Lumi Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG066M)

Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒

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RG066S Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次 520.00元
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碧云天生产的Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(Renilla-Lumi™ Plus Luciferase Reporter Gene Assay Kit,Renilla-Lumi™ Plus Luciferase Assay Kit),简称Renilla-Lumi Plus,是一种无需洗涤或收集细胞的通过化学发光法直接测定细胞内海肾萤光素酶(sea pansy (Renilla reniformis) luciferase,简称Renilla luciferase)活性的超高灵敏度、高信号稳定性的一步法检测试剂盒。与培养液等体积的检测试剂加入到细胞培养板内反应5分钟,即可进行化学发光检测。本试剂盒使用灵活便捷、测定样品的线性范围宽、检测灵敏度高,特别适合于Renilla luciferase表达水平较低的样品检测。另外,本产品也可以用于裂解并收集保存的细胞样品的检测。
本产品的性能基本达到甚至在有些方面优于国外主要同类产品。本产品的用途与碧云天的同类产品Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称Renilla-Lumi)及Promega公司的Renilla-Glo™ Luciferase Assay System (简称Renilla-Glo)基本相同,但是本产品的检测灵敏度显著优于Renilla-Lumi和国外同类产品(Competitor P),发光强度比Renilla-Lumi提高了约2-4倍,比国外同类产品提高了约4-6倍;化学发光的信号稳定性稍低于Renilla-Lumi和国外同类产品(Competitor P),半衰期约15分钟。本产品与Renilla-Lumi及国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。
本产品发光强度高,特别适用于Renilla luciferase表达水平低的样品检测对于相同的样品,本产品的发光效果比Renilla-lumi强约2-4倍,比国外同类产品(Competitor P)强约4-6倍。实测效果可能会因细胞种类、检测环境等的不同有所差异。

Renilla-Lumi Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG066M)

图1. Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(Renilla-Lumi Plus)和碧云天的同类产品Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(Renilla-Lumi)及国外同类产品(Competitor P) 对转染海肾萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞的检测效果。实际读数会因细胞种类、转染效率、所用质粒、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

Renilla-Lumi Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG066M)

图2. 本产品对转染海肾萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果。根据共转的EGFP表达质粒,实测转染效率约为60-70%。实际读数会因细胞种类、转染效率、所用报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品的检测灵敏度高,测定样品的线性范围宽。96孔板中,通常本产品可以在20万个细胞范围内呈现良好的线性关系。不同的细胞、不同的萤光素酶表达水平时的检测细胞数量的上限可能有所差异,当海肾萤光素酶表达水平很高时,可能只在10万个细胞范围内有良好的线性关系,但是化学发光读数还是会随着细胞数量的增加而继续升高的。本产品对转染海肾萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果参见图2。
本产品操作简单,检测速度快,完成整个检测流程仅需约10分钟。本产品比其它海肾萤光素酶测定方法更加简单快捷。细胞可以在同一块多孔板中培养和检测,无需洗涤细胞,也无需更换或去除培养液,只需把试剂盒提供的Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测底物和Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液按照1:100的比例混合配制成Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测工作液,再与培养的细胞等体积混合,反应5分钟后即可进行化学发光检测。
本产品稳定性好。本试剂盒中的Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液稳定性好,反复冻融10次、4℃或室温保存3天对检测效果基本无影响。37℃保存1天,仍可保留90%以上的检测效果。
本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测(high-throughput screening)。本产品不仅可以等体积加入到细胞培养孔中进行直接检测,也可以先使用RG129S/M海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液裂解并收集细胞后再用本产品进行检测。
本产品兼容性强。本产品兼容各种常见培养液,正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇对信号和稳定性基本没有影响,常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。
海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化腔肠素(Coelenterazine)氧化成
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Renilla-Lumi Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG066M)

图3. 海肾萤光素酶的检测原理图。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
对于96孔板,推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒分别可以进行100次或1000次检测。对于384孔板,推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒可以进行400次或4000次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然我们有检测数据显示适当减少检测试剂的用量很可能仍然会得到较好的检测结果,但对于细胞数量偏多、细胞数量特别少或者重复性要求比较高的情况,建议按照推荐用量进行检测。 
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG066M-1 Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液 100ml
RG066M-2 Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测底物(100X) 1ml
说明书 1份

保存条件:
Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液,-20℃保存一年有效;Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测底物(100X),-20℃避光保存6个月有效,-80℃避光保存一年有效。
注意事项:
本产品的化学发光信号随时间的变化衰减较快,半衰期仅约15分钟,为取得比较满意的检测效果请严格控制检测时间,尽量在加入检测试剂后5到10分钟内进行检测。
由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细胞、Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液均需达到室温后再进行测定。可将检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后使用。
本试剂盒中的Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液在反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
请使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。
Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测底物(100X)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发,有时会在初次使用时发现体积明显小于0.1ml的情况,此时用无水乙醇把体积补足至0.1ml,并混匀后即可使用。
Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用,-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降,因此不可配制成工作液后长期保存。
待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。
为避免细胞转染效率的差异而带来的误差,如果有必要,可以同时转染萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)的报告基因质粒作为内参,采用碧云天的Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG088S/RG088M)进行检测。
如果希望先裂解并收集细胞样品,然后再使用本试剂盒进行检测,须单独采购RG129S/M海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液。其它裂解液未经测试。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 细胞的准备:
使用适合进行化学发光检测的96孔板,每孔接种100μl细胞(如使用384孔板,每孔接种25μl细胞,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养和细胞转染的常规方法培养和转染细胞。如有需要,可加入药物处理细胞。
2. 检测试剂的准备:
a. 融解Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液,并达到室温。Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测底物(100X) 置于冰浴或冰盒上备用。
b. 按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量,配制适量Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测工作液。按照1:100的比例混合适量Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测底物(100X)和Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液,即配制成Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测工作液。例如,5毫升Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测缓冲液中加入50微升Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测底物(100X)充分混匀后即可配制成约5毫升Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测工作液。注:严格来说100X底物需要按照1:99进行稀释和配制,为便于计算和操作,按照1:100进行操作也可以获得一致的检测效果。
3. 萤光素酶检测:
a. 取出细胞培养板在室温平衡10分钟(通常不宜超过30分钟)。
b. 96孔板每孔加入100μl Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测工作液(384孔板每孔25μl)。
c. 室温(约25℃)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。
d. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
4. 裂解并收集细胞后的检测(本步骤仅当细胞量比较大的情况下,例如细胞培养在培养皿或6孔板中时,可以考虑采用):
a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的RG129S/M海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
c. 取20μl样品,加入100μl已经融解并平衡至室温的Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶检测试剂,适当混匀。
d. 室温(约25℃)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。注意:如果对于数据的稳定性的要求不太高,可以忽略本步骤,在混匀后立即进行化学发光检测。
e. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

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RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG129S/M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

Renilla-Lumi Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG066M)

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使用本产品的文献:

1. Xiaohong Lu,Yuanjie Yu,Shiyun Tan
The role of the miR-21-5p-mediated inflammatory pathway in ulcerative colitis
Exp Ther Med. 2020 Feb;19(2):981-989.;doi: 10.3892/etm.2019.8277. (IF 1.785)

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

加工定制

Sciencetool真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS/FS410V非常适合于化学、制药、石化等领域对各种样品进行真空过滤。每一个型号都针对一类特殊的样品进行过滤。
瓶顶式真空过滤装置R300-500
流动相溶剂真空过滤装置R300MF
耐化学腐蚀真空过滤装置CH300A
野外便携式真空过滤装置R300P-DC
进口

Sciencetool真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS/FS410V

 产品简述:

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

瓶顶式真空过滤装置R300-500

漏斗可直接连接实验室蓝盖试剂瓶,便于过滤完后拔下漏斗盖上瓶盖,即可保存滤液.非常适合实验室缓冲液培养基或其它试剂的除菌除杂质过滤.

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

耐化学腐蚀真空过滤装置CH300A

真空泵采用耐化学腐蚀性能很好的聚四氟乙烯PTFE材质制造,搭配玻璃过滤瓶组,具有很好的耐化学腐蚀性能.适合过滤有机溶剂或其它腐蚀性较强的样品.

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

流动相溶剂真空过滤装置R300MF

适合于HPLC等流动相溶剂的过滤,搭配1000ml砂芯过滤瓶组。砂芯滤膜垫片制作均匀,滤速更快!带有双重防废液倒吸保护,使用更安心。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

一般溶液真空过滤装置R300A

适合实验室不具有腐蚀性的一般溶液的过滤。漏斗采用PES旋卡式结构,耐摔,换膜时单手就可以旋开过滤杯,废液瓶带底部排水口可以快速排液,不需要停下工作倒出液体;配固定底座不宜倾倒。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

悬浮物真空过滤装置R300SS

专为SS水中悬浮固形物检测过滤设计。配置齐全,包含了抽滤泵、漏斗、收集瓶、泵管、阻水过滤器和微孔滤膜等悬浮物过滤所需的各项附件,使用更方便。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

野外便携式真空过滤装置R300P-DC

真空泵采用DC12V直流电源,电源线可直接连接汽车点烟器电源或蓄电瓶,便于野外使用。抽滤瓶为全塑料材质,轻便耐摔,方便运输。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

粘稠样品真空过滤装置FS410V

内置的真空泵真空度可达0.097MPa,较高的真空度搭配特别设计的抽滤瓶滤膜垫片。适合颗粒物或固体含量较高、粘稠样品的过滤。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

微生物限度检查真空过滤装置R300B

专为实验室微生物限度检查过滤设计。配有316L不锈钢材质的过滤漏斗,可使用火焰直接灭菌。配有微生物检查过滤膜和火焰灭菌喷枪。配置齐全,使用便利。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

培养基除菌过滤装置R320A

1000ml不锈钢正压桶式过滤器搭配无油式空压机,适合在超净台或生物安全柜内过滤细胞或组织培养液。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

平板过滤器系统PF-142

可连接蠕动泵使用的全不锈钢过滤器,滤膜直径大,过滤时蠕动泵会直接输送液体压过滤膜,不需要人工倒入滤液。适合5000ml以上过滤量较大的用户使用。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

三联真空过滤装置BV-321-A

单次可同时过滤三组样品,每个过滤漏斗也可以单独控制。支架采用阳极铝制造,漏斗为PES材质,配有3000ml集液瓶和无油抽滤泵。具有极高的性价比。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

六联真空过滤装置BV-330-B

单次可同时过滤六组样品,每个过滤杯可以单独控制。采用全不锈钢材质制造,配有抽滤泵、支架、滤杯、集液瓶、滤膜、灭菌用火焰枪,配置齐全,方便使用。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

微量样品过滤瓶FU-M1

搭配15ml过滤杯和125ml集液瓶,可搭配直径25mm的微孔滤膜。非常适合珍贵的样品或者极少量的样品过滤,较小的滤瓶搭配小尺寸滤膜会减少不必要的样品损耗。

真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS

大容量真空过滤装置FU-L1

搭配1000ml过滤杯和4000ml集液瓶,适配直径90mm的大尺寸过滤膜。适合大量样品的过滤,大尺寸的过滤膜会显著提高抽滤速率。

Sciencetool真空过滤装置R300-500/R300MF/R300SS/FS410V

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One-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG056S)

One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

产品编号: RG056S

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487.00 10

价格: ¥ 487.00

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RG056S One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次 487.00元
RG056M One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次 2822.00元

碧云天生产的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(One-Lumi™ II Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit,One-Lumi™ II Firefly Luciferase Assay Kit),简称One-Lumi II,是一种无需洗涤或收集细胞的通过化学发光法直接测定细胞内萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的高灵敏度、高信号稳定性的一步法检测试剂盒。

本产品是One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称One-Lumi,产品编号为RG055)的不同包装版本,两者的检测效果完全一致。One-Lumi为即用型液体,优点是无需配制即可以直接使用,缺点是需要-80ºC保存,如果在-20ºC保存时间较长后检测效果会逐渐下降;本产品,即One-Lumi II,为One-Lumi的冻干粉版本,使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用,优点是在-20ºC保存非常稳定。

配制好的One-Lumi II萤火虫萤光素酶检测试剂,按照与培养液等体积的比例加入到细胞培养板内反应5分钟,即可进行化学发光检测。本试剂盒使用灵活便捷、检测灵敏度高、发光信号稳定、测定样品的线性范围宽,性能优于国外主要同类产品。另外,本产品也可以用于裂解并收集保存的细胞样品的检测。

本产品的性能优于国外主要同类产品。本产品的用途与碧云天的同类产品Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称Bright-Lumi)、Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(简称Steady-Lumi)及Promega公司的One-Glo™ Luciferase Assay System (简称One-Glo)基本相同,本产品的检测灵敏度稍弱于Bright-Lumi,但显著优于Steady-Lumi和国外同类产品(Competitor P) (图1A、C),发光强度比国外同类产品(Competitor P)提高了约40%;化学发光信号的稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B),显著优于Bright-Lumi,稍弱于Steady-Lumi (图1D)。本产品与Bright-Lumi、Steady-Lumi和国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。

One-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG056S)

图1. One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(One-Lumi II)和碧云天的同类产品Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Bright-Lumi)、Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Steady-Lumi)及国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞的检测效果。One-Lumi II与碧云天生产的One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(One-Lumi)的检测效果完全一致。图A和图B为One-Lumi即One-Lumi II和Competitor P的化学发光强度和化学发光稳定性的检测效果对比图,图C和图D为One-Lumi即One-Lumi II和Bright-Lumi、Steady-Lumi的化学发光强度和化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品,本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)强约25-70% (图1A),比Steady-Lumi强约2-6倍(图1C),实测效果可能会因细胞种类、检测环境等的不同有所差异。

本产品的检测灵敏度高,测定样品的线性范围宽。96孔板中,通常本产品可以在20万个细胞范围内呈现良好的线性关系。不同的细胞、不同的萤光素酶表达水平的检测细胞数量的上限可能有所差异,当萤火虫萤光素酶表达水平很高时,可能只在10万个细胞范围有良好的线性关系,但是化学发光读数还是会随着细胞数量的增加而继续升高的。本产品对转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果参见图2。

One-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG056S)

图2. 本产品对转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒的不同数量的HeLa细胞的检测效果。根据共转的EGFP表达质粒,实测转染效率约为60-70%。实际读数会因细胞种类、转染效率、所用报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,完成整个检测流程仅需约10分钟。本产品比其它萤光素酶测定方法更加简单快捷,细胞可以在同一块多孔板中培养和检测,无需洗涤细胞,也无需更换或去除培养液,只需用试剂盒提供的检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂后,与培养的细胞等体积混合,反应5分钟后即可进行化学发光检测。并且产生的化学发光信号十分稳定,在反应开始60分钟后仍可保留60%以上的信号。使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测。

本产品稳定性好。本产品在-20℃可以长期保存,配制成One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂后的稳定性也非常好,反复冻融5次对检测效果无明显影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%。One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂在4ºC条件下保存3天检测效果下降不到20%,保存5天检测效果下降不超过30%,保存7天仍可保留65%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果,室温保存3天可保留60%以上的检测效果,在37ºC保存1天可保留60%以上的检测效果。One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂即使仅保留约50%的检测效果,仍可以满足各种常规检测。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测(high-throughput screening)。本产品不仅可以等体积加入到细胞培养孔中进行直接检测,也可以先使用RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液裂解并收集细胞后再用本产品进行检测。

本产品兼容性强。本产品兼容各种常见培养液,正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇对信号和稳定性基本没有影响,常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。

萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出波长为560nm左右的生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物等处理对目的基因的转录调控作用。本试剂盒的检测原理参考图3。

One-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG056S)
图3. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

碧云天的三款一步法萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒的主要特点和差异如下。如果希望发光信号比较强,并在30分钟内即可进行检测,推荐使用Bright-Lumi;如果对信号稳定性要求特别高,需要批量或连续操作,推荐使用Steady-Lumi;如果对发光信号和稳定性都有要求,推荐使用One-Lumi。

产品编号 RG052S/M RG055S/M RG056S/M RG059S/M
产品简称 Bright-Lumi II One-Lumi One-Lumi II Steady-Lumi II
使用便捷性 方便 非常方便 方便 方便
检测灵敏度 特别灵敏 非常灵敏 非常灵敏 较灵敏
信号强度 非常高 较高 较高
信号半衰期 0.5-1小时 1-2小时 1-2小时 5-6小时
产品稳定性 特别稳定 非常稳定 特别稳定 特别稳定
线性范围(细胞数) 50个-10万个 50个-10万个 50个-10万个 50个-20万个
推荐指数 ★★★★★ ★★★★ ★★★★ ★★★★

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:

http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

对于96孔板,推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板,推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然我们有检测数据显示适当减少检测试剂的用量很可能仍然会得到较好的检测结果,但对于细胞数量偏多、细胞数量特别少或者重复性要求比较高的情况,建议按照推荐用量进行检测。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG056S-1 One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG056S-2 One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测底物 1瓶
说明书 1份
产品编号 产品名称 包装
RG056M-1 One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测缓冲液 100ml
RG056M-2 One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测底物 1瓶
说明书 1份
保存条件:

-20ºC避光保存,至少一年有效。检测缓冲液和检测底物混合后配制成的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂,-80ºC避光保存,至少一年有效;-20ºC避光保存,推荐3-6个月内使用。

注意事项:

对于订购后可能放置较长时间后再使用的,或者对于检测结果的精度要求特别高的,推荐订购One-Lumi™ II;对于订购后短期内使用完毕的,推荐订购使用更加便捷的One-Lumi™。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细胞和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测缓冲液在室温或不超过25ºC的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测试剂使用。

尽管经测试检测缓冲液和检测底物混合后配制成的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,为保证检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果,建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。

请使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

为避免细胞转染效率的差异而带来的误差,如果有必要,可以同时转染海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参,采用碧云天的Dual-Lumi™/Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG088S/RG088M/RG089S/RG089M)进行检测。

如果希望先裂解并收集细胞样品,然后再使用本试剂盒进行检测,须单独采购RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。其它裂解液未经测试。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.细胞的准备:
使用适合进行化学发光检测的96孔板,每孔接种100μl细胞(如使用384孔板,每孔接种25μl细胞,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养和细胞转染的常规方法培养和转染细胞。如有需要,可加入药物处理细胞。
2.检测试剂的准备:
融解冻存的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测缓冲液,将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中,旋紧瓶盖后适当颠倒混匀,当检测底物全部溶解并混匀后即为One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂。按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量,取适量One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂,平衡至室温。
注:冻干粉状的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口,旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面,使粉末尽量掉落至瓶底,然后再轻轻旋开瓶盖,并注意不要损失冻干粉。
3.萤光素酶检测:
a.取出细胞培养板在室温平衡10分钟(通常不宜超过30分钟)。
b.96孔板每孔加入100μl One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂(384孔板每孔25μl)。
c.室温(约25ºC)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。
d.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
4.裂解并收集细胞后的检测(本步骤仅当细胞量比较大的情况下,例如细胞培养在培养皿或6孔板中时,可以考虑采用):
a.对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的RG126S/M萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100μl。
b.充分裂解后,10,000-15,000g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
c.取20μl样品,加入100μl已经平衡至室温的One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶检测试剂,适当混匀。
d.室温(约25ºC)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。注意:如果对于数据的稳定性的要求不太高,可以忽略本步骤,在混匀后立即进行化学发光检测。
e.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
常见问题:
1.Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2.可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

产品编号 产品名称 包装
C0508 磷酸钙法细胞转染试剂盒 >200次
C0526-0.5ml Lipo6000™转染试剂 0.5ml
C0526-1.5ml Lipo6000™转染试剂 1.5ml
C0526-7.5ml Lipo6000™转染试剂 5×1.5ml
D2102-1μg pGL6 (报告基因质粒) 1μg
D2105-1μg pGL6-TA (报告基因质粒) 1μg
D2106-1μg pGL6-miR (报告基因质粒) 1μg
D2762-1μg pRL-SV40-N (报告基因质粒) 1μg
D2768-1μg pRL-SV40-C (报告基因质粒) 1μg
FCP966-80pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP966-320pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱
FCP968-80pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP968-320pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱
RG005 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
RG006 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
RG016 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
RG017 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
RG027 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
RG051S/M Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG052S/M Bright-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG055S/M One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG056S/M One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG058S/M Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG059S/M Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG089S/M Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG129S/M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

One-Lumi II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG056S)

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