胶原酶 I II III IV四个型之间区别及用法

发表于2024年4月23日由上海金畔生物科技有限公司

消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶，透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用；胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，以胶原I为主。

胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等. 胰蛋白酶作用较强，容易造成平滑肌细胞损坏；
胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL 此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本,所以选择价廉物美的胶原酶是关键，所以不光要看重量还要看每MG的活性单位.

胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质，因此，这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感，极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。

胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

中文名称： I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶

英文名称：Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V

CAS号: 9001-12-1

规格：100mg, 1g ,5

产地：Worthington sigma invitrogen

外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉；

保存：-20°C

胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,zui终配制成为200u/mL就可以了.,

胰蛋白酶的配制、过滤除菌与分装过程

准备样品：干粉，PBS缓冲液，离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器。

准备工作：将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。

配制：

1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度0.25％用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS（PH到7.2左右）液中。搅拌混匀，置于4℃内12小时。

2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。

3.分装：将除菌之后的胰蛋白酶用移液枪分装至

A: Collagenase I（胶原酶I型） : 主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。

订货信息

货号	品名	包装	价格	品牌
LS004194	Collagenase I（胶原酶I型）	100 mg	476	Worthington
LS004196	Collagenase I（胶原酶I型）	1 gm	2464	Worthington
LS004197	Collagenase I（胶原酶I型）	5 gm	10360	Worthington
17100-017	Collagenase I（胶原酶I型）	1g	3025	invitrogen
C0130-100MG	Collagenase I（胶原酶I型）	100mg	526.5	sigma
C0130-500MG	Collagenase I（胶原酶I型）	500MG	1473.03	sigma
C0130-1G	Collagenase I（胶原酶I型）	1G	2208.96	sigma
C0130-5G	Collagenase I（胶原酶I型）	5G	6113.25	sigma

B: Collagenase II（胶原酶II型） : 适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织细胞的分离。

订货信息

货号	品名	包装	价格	品牌
LS004177	Collagenase II（胶原酶II型）	5 gm	10360	Worthington
LS004176	Collagenase II（胶原酶II型）	1 gm	2464	Worthington
LS004174	Collagenase II（胶原酶II型）	100 mg	476	Worthington
17101-015	Collagenase II（胶原酶II型）	1g	3025	invitrogen
C6885-25MG	Collagenase II（胶原酶II型）	25MG	508.95	sigma
C6885-100MG	Collagenase II（胶原酶II型）	100mg	778.05	sigma
C6885-500MG	Collagenase II（胶原酶II型）	500MG	1,980.81	sigma
C6885-1G	Collagenase II（胶原酶II型）	1G	2,971.80	sigma
C6885-5G	Collagenase II（胶原酶II型）	5G	7,926.75	sigma

C: Collagenase III（胶原酶 III型）对哺乳动物的组织有广谱的消化作用

订货信息

货号	品名	包装	价格	品牌
LS004182	Collagenase III（胶原酶 III型）	1 gm	2464	Worthington
LS004183	Collagenase III（胶原酶III型）	5 gm	10360	Worthington
LS004180	Collagenase III（胶原酶III型）	100 mg	476	Worthington

D: Collagenase IV（胶原酶IV型）:胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织, 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用。

订货信息

货号	品名	包装	价格	品牌
17104-019	Collagenase IV（胶原酶IV型）	1g	3025	invitrogen
C5138-25MG	Collagenase IV（胶原酶IV型）	25MG	452.79	sigma
C5138-100MG	Collagenase IV（胶原酶IV型）	100mg	772.20	sigma
C5138-500MG	Collagenase IV（胶原酶IV型）	500MG	2,530.71	sigma
C5138-1G	Collagenase IV（胶原酶IV型）	1G	4,095.00	sigma
C5138-5G	Collagenase IV（胶原酶IV型）	5G	15,420.60	sigma
LS004189	Collagenase IV（胶原酶V型）	5 gm	10360	Worthington
LS004188	Collagenase IV（胶原酶V型）	1 gm	2464	Worthington
LS004186	Collagenase IV（胶原酶V型）	100 mg	476	Worthington

E: Collagenase V（胶原酶V型）: 胶原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，结缔组织分离。

货号	品名	包装	价格	品牌
LS005283	Collagenase V（胶原酶V型）	5 gm	12460	Worthington
LS005282	Collagenase V（胶原酶V型）	1 gm	2968	Worthington
LS005280	Collagenase V（胶原酶V型）	100 mg	588	Worthington
C9263-25MG	Collagenase V（胶原酶V型）	25MG	469.17	sigma
C9263-100MG	Collagenase V（胶原酶V型）	100mg	625.95	sigma
C9263-500MG	Collagenase V（胶原酶V型）	500MG	1,814.67	sigma
C9263-1G	Collagenase V（胶原酶V型）	1G	2,845.44	sigma
C9263-5G	Collagenase V（胶原酶V型）	5G	5,686.20	sigma

我们公司zui大优势是强大的采购，

1：基本什么都能进口，血清，抗体，耗材，还有部分限制进口的，

2：货品全，现经营过700多个品牌，基本所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷偏的产品那就更有优势，

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6：我们还是santa,Advanced Biotechnologies Inc;Athens Research & Technology, bangs, BBInternational, crystalchem, dianova, FD Neurotechnologies, Inc. FormuMax Scientific, Inc; Genebridege; Glycotope Biotechnology GmbH; iduron; Innovative Research of America； Ludger ； neuroprobe; omicronbio; Polysciences; prospecbi; QA-BIO；quickzyme；RESEARCH DIETS, INC；sterlitech；sysy；TriLink BioTechnologies, Inc；worthington-biochem;zyagen;……几十家国外公司代理
7：我们还从事invitrogen，qiagen; abcam ;sigma;neb; roche;merck; rnd; BD; GE; pierce; BioLegend….等*批发

chondrex免疫级牛II型胶原蛋白说明书

发表于2024年4月8日由上海金畔生物科技有限公司

chondrex免疫级牛II型胶原蛋白说明书

产品名称	免疫级牛II型胶原蛋白
目录编号	20021
数量	10 毫克，冻干

说明：高纯度II型胶原蛋白（用3M胍、DEAE纤维素和Na2HPO4处理）应用：可用于各种目的，例如通过SDS凝胶进行胶原蛋白分析的标准，MMP-1、MMP-8和MMP-13的基质，以及作为免疫动物的抗原，用于在某些物种和实验动物品系中诱导胶原蛋白诱导的关节炎（CIA）。
数量：10 mg
形态：冻干粉
来源：牛关节软骨
分子量：300 kDa
纯度：经SDS-PAGE分析>99%，不含胃蛋白酶和蛋白多糖
储存：黑暗中4°C
稳定性：2年
注：溶于酸性缓冲液（最大4毫克/毫升），但难以溶于中性缓冲液。为了将本产品溶解在中性缓冲液中，首先将胶原蛋白溶解在0.01M或0.05M乙酸中，浓度为1-4 mg/ml，然后将胶原蛋白溶液添加到所需的中性缓冲液中，例如2-10X TrisNaCl（NaCl最终浓度：0.15-0.2M），或在4°C下对1X中性缓冲液进行透析。
注1：为了避免在中性条件下形成原纤维，请将溶液放在冰上。
注2：II型胶原蛋白的理化性质不同于I型胶原蛋白，溶解在中性缓冲液中的II型胶原蛋白在37°C下不会形成稳定的凝胶。为了制备II型胶原蛋白凝胶，可能需要额外的成分，如I型胶原蛋白或其他物质。

现货chondrex免疫级牛II型胶原蛋白说明书

发表于2024年4月7日由上海金畔生物科技有限公司

现货chondrex免疫级牛II型胶原蛋白说明书

免疫级牛II型胶原蛋白

产品名称	免疫级牛II型胶原蛋白
目录编号	20021
数量	10 毫克，冻干

chondrex 20021说明：高纯度II型胶原蛋白（用3M胍、DEAE纤维素和Na2HPO4处理）
chondrex 20021用途：可用于各种用途，如SDS凝胶胶原分析标准、MMP-1、MMP-8和MMP-13基质，以及作为免疫动物的抗原，用于在某些物种和实验动物品系中诱导胶原诱导的关节炎（CIA）。
chondrex 20021数量：10 mg
形态：冻干粉
资料来源：牛关节软骨
分子量：300 kDa
纯度：通过SDS-PAGE分析，纯度大于99%，不含胃蛋白酶和蛋白聚糖
储存：4°C，避光保存
稳定性：2年
注：溶于酸性缓冲液（最大4毫克/毫升），但难溶于中性缓冲液。为了将本产品溶解在中性缓冲液中，首先将胶原蛋白溶解在0.01M或0.05M醋酸中，浓度为1-4 mg/ml，然后将胶原蛋白溶液添加到所需的中性缓冲液中，如2-10X TrisNaCl（NaCl最终浓度：0.15-0.2M），或在4°C下对1X中性缓冲液进行透析。
注1：为了避免在中性条件下形成纤维，请将溶液放在冰上。
注2：II型胶原的物理化学性质不同于I型胶原，溶解在中性缓冲液中的II型胶原在37°C下不会形成稳定的凝胶。为了制备II型胶原凝胶，可能需要I型胶原或其他物质等其他成分。

Collagenase II 胶原酶II型说明书

发表于2024年4月7日由上海金畔生物科技有限公司

Collagenase II 胶原酶II型说明书

产品详情

货号	规格	价格
LS004174-100mg	100mg	520
LS004176-1g	1g	3000
LS004177-5g	5g	13500
LS004177-15g	15g	询价

产品描述

胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：

1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；

2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；

3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；

4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

本品为II型胶原酶，≥125 U/mg solid，可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。

运输及保存条件

室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。

使用方法

1. 胶原酶储存液的配制

向每管100 mg的胶原酶中加入100 µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成1g/mL（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20 °C避光冻存。

使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。

2．组织的分离

1. 使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；

2. 利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；

3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；

4. 于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。

5. 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未全部解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；

6. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

7. 细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

8. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3．器官灌注

1. 向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率；

2. 按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；

3. 将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；

4. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

5. 细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

6. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

Worthington II型胶原酶现货供应

发表于2024年3月31日由上海金畔生物科技有限公司

世界*实验材料供应商Worthington 上海金畔生物为其中国代理，Worthington 在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， Worthington 就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

Worthington 中国代理，Worthington 上海代理，Worthington 北京代理，Worthington 广东代理，Worthington 江苏代理 Worthington 湖北代理, Worthington 天津, Worthington 黑龙江代理, Worthington 内蒙古代理, Worthington 吉林代理, Worthington 福建代理, Worthington 江苏代理, Worthington 浙江代理, Worthington 四川代理,

Worthington Biochemical是一家始于1947年，位于美国新泽西州的生产高纯度酶类及相关生化药剂的世界*公司，公司致力于为客户提供zui的产品及服务。Worthington供应的生物药剂主要纯化于牛胰腺、植物、发酵产物及其他自然资源，公司专长的蛋白提取与纯化技术保证了其所提供酶类拥有与其提取来源物中同等的生物活性，从而保证了研究结果的可靠性和稳定性。目前Worthington提供的产品覆盖细胞分离消化酶、DNA酶、RNA酶等几乎所有生命科学研究领域。

公司主要产品：

一、无动物成分来源的新产品

1、来源于溶组织梭状芽孢杆菌发酵产物的胶原酶：该系列胶原酶*避免了动物来源成分，适用于无动物源成分胶原酶生物研究。主要产品包括：

CLSAFA：主要为胶原酶活性及其次的蛋白酶活性，性能与1/2型胶原酶类似。

CLSAFB：比CLSAFA有更高的胶原酶活性及酪蛋白酶活性

CLSAFC：有较低的胰蛋白酶活性，性能与4型胶原酶类似。

STZ1 & STZ2：为STEMxyme? AOF Collagenase/Neutral Protease (Dispase?) 混合物酶，适用于干细胞分离。

2、肌血球素：肌血球素是一个球形小分子，分子量约17KD，含有一个亚铁血红素分子，负责心肌和骨骼肌细胞哦氧气存储。

二、经典细胞分离试剂

1、细胞分离优化系统

Worthington Biochemical 公司提供一系列经典的组织/细胞分离用酶的解决方案，包括多种酶类及相应的使用说明、参考文献与操作手册，致力于使客户利用酶促消化分离获得zui大产量及活度的细胞。Worthington Biochemical 提供的产品种类繁多，适应于不同类型组织细胞的分离，价格合理。主要产品包括胶原蛋白酶1/2/3/4，胰蛋白酶及其抑制剂，透明质酸酶，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶以及DNA酶，中性蛋白酶等。

2、肝细胞分离系统

通常分离肝细胞的酶都是初制的或部分纯化的酶类，里面除了胶原酶外还含有多种杂蛋白酶，不利于肝细胞的分离纯化，实验可重复率低。Worthington 推出的精制1/4型胶原酶成分明确，特别适宜于肝细胞的分离纯化，性能可靠，实验可重复率高，实验方案及参数固定，所分离的肝细胞纯度与活性均较高。

3、新生鼠心肌细胞分离系统

Worthington供应的新生鼠心肌细胞分离系统使用纯化的分离酶，使心肌细胞分离批次间差异大为减小，而且细胞产量、纯度及活性均得以提高。分离操作方便，方案可靠，实验可重复率高。

4、木瓜蛋白酶分离系统

Worthington供应的木瓜蛋白酶适宜于消化分离形态完整、单个分散的细胞，适用于细胞培养、流式细胞术等多个研究领域。该产品还可适用于温和消化分离中枢神经系统组织（对胎鼠及新生鼠脑神经元分离尤为适宜），获得的细胞产量与活性优于胰蛋白酶。

三、特色产品:

1、胶原酶

?Type 1含有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶及胰蛋白酶活性。

?Type 2 含有更高水平的蛋白酶活性，特别是梭菌蛋白酶。

?Type 3 含有zui低水平的secondary proteases.

?Type 4在消化分离细胞时能zui大程度的保护细胞膜蛋白及上面的受体活性（胰蛋白酶消化时会损伤膜蛋白及其上受体）。

?Type 5 含有高度的胶原酶和酪蛋白酶活性。

?纯化胶原酶（CLSPA/CLSPANK）：含有高纯度的胶原酶。

2、DNA酶

Worthington提供不同纯化水平的NDA酶以适应于不同的研究目的，其中DPRF与DPRFS含有zui低水平的RNA酶及蛋白酶活性，

适宜用于在消化清除DNA的同时zui大程度保护RNA及目的蛋白/酶类的研究，如RT-PCR实验中RNA制备时基因组DNA清除、转录后清除DNA模板、northern杂交时清除非目的DNA、DNA缺口平移、DNA 绘图, 核RNA/蛋白的分离，质粒构建，RNA合成等。Worthington不仅提供牛胰腺来源的DNA酶，而且还提供微生物来源的重组DNA酶，*无动物来源成分，客户可根据研究需要进行选择。

3、RNA酶

Worthington提供的RNA酶 A/ B纯化自牛胰腺组织，并有多种纯化级别适宜于不同研究目的，如无DNA酶的RNA适宜于DNA的分离纯化，无蛋白酶RNA酶适宜于需保存蛋白质完整性与活性。

4、弹性蛋白酶

Worthington提供的弹性蛋白酶纯化自猪胰腺，被广泛应用于组织/细胞的消化分离，特别适宜于II型肺细胞的分离。

5、木瓜蛋白酶：

Worthington提供的木瓜蛋白酶纯化自番木瓜汁，相交于胰腺蛋白酶，木瓜蛋白酶能消化更多的蛋白亚基。在组织消化研究中，木瓜蛋白酶比其他蛋白酶有更高的效率及更低的损伤，适宜于神经细胞的分离。

6、胰蛋白酶

Worthington提供的胰蛋白酶纯化自牛胰腺组织，特别适宜于蛋白质测序研究（TRTPCK）和组织/细胞消化分离研究。该系列产品纯度高，保证了产品很好的溶解度、较小的批次差异及细胞毒性。除了高纯度胰蛋白酶外，Worthington还提供无病毒及支原体的胰蛋白酶以适应不同的研究需要。

货号	品名	活动力	规格
LS004174	Collagenase, Type 2 Prepared to contain higher clostripain activity. Suggested for bone, heart, liver, thyroid and salivary primary cell isolation. Supplied as a dialyzed, lyophilized powder. Store at 2-8癈.	≥125 units per mg dry weight	100 mg
LS004176			1 gm
LS004177			5 gm
LS004179			Bulk

LS004176 Collagenase, Type 2 (CLS-2)2型胶原酶大量现货，*

MHC II Dextramer – 识别抗原特异性CD4+ T 细胞

发表于2024年3月26日由上海金畔生物科技有限公司

immudex MHC II Dextramer® – 识别抗原特异性 CD4+ T 细胞

提高灵敏度以获得可靠结果

通常在抗原呈递细胞表面表达，MHC II 分子对接并启动 CD4+ T 细胞。

鉴于抗原特异性 CD4+ T 细胞在招募和协调其他免疫细胞方面的作用，它们对许多疾病的免疫反应至关重要。使用标准试剂检测和分层通常具有挑战性，通过 Dextramer® 技术的高亲和力和增强的灵敏度揭示抗原特异性 CD4+ T 细胞。

MHC II Dextramer® 试剂在灵活的葡聚糖骨架上具有多种 MHC 肽复合物和荧光团，专为 CD4+ T 细胞反应的高分辨率表征而设计，即使在低丰度细胞和血液等复杂基质中也是如此。

MHC II Dextramer® 通过流式细胞术检测血液样本中的 DRB1*0101/EBV 特异性 T 细胞（内部数据）。

细致而精确的研究工具

使用 MHC II Dextramer® 试剂突破流式细胞仪检测的界限。MHC II Dextramer® 试剂专为高亲和力和出色的信噪比而设计，使您能够自信地检测抗原特异性 CD4+ T 细胞。

全面了解 CD4+ T 细胞反应，甚至是低亲和力的反应。
确保一致、可重复和可比较的结果。
扩大您的研究范围。
确保实验的灵活性。

目录号或所需的 MHC 等位基因-肽组合。
– 查阅我们的可用MHC 等位基因列表 – 使用我们的预测工具
计算预测的 MHC 肽亲和力
荧光团（PE、APC、FITC 或无）
测试规模（50,150、500、1000 次测试）。一项测试是 10 µl 试剂，足以染色 1–3 x 10^6 淋巴细胞或 1–3 x 10^5 克隆抗原特异性 T 细胞。

Cat. No.	Allele	Peptide	Antigen	Disease/Organism
FA10001	DRB1*0101	PKYVKQNTLKLAT	HA	Influenza
FA10002	DRB1*0101	PVSKMRMATPLLMQA	CLIP	Endogenous Ag
FA10003	DRB1*0101	TSLYNLRRGTALA	EBNA1	EBV
FA10004	DRB1*0101	PEQWMFQGAPPSQGT	EBNA3A	EBV
FA10005	DRB1*0101	QEIYMQHTYPISA	Tetanus Toxin	Tetanus
FA10006	DRB1*0101	LPLKMLNIPSINVH	pp65	CMV
FB10001	DRB1*0401	PKYVKQNTLKLAT	HA	Influenza
FB10002	DRB1*0401	PVSKMRMATPLLMQA	CLIP	Endogenous Ag
FB10012	DRB1*0401	GAGSLQPLALEGSLQKRG	Proinsulin	Diabetes
FB10013	DRB1*0401	IAFTSEHSHFSLK	GAD65	Diabetes
FB10014	DRB1*0401	NFIRMVISNPAAT	GAD65	Diabetes
FD10001	DRB1*1101	PKYVKQNTLKLAT	HA	Influenza
FD10002	DRB1*1101	PVSKMRMATPLLMQA	CLIP	Endogenous Ag
FD10020	DRB1*1101	EHPTFTSQYRIQGKL	pp65	CMV
FH10002	DPB1*0401	PVSKMRMATPLLMQA	CLIP	Endogenous Ag
FH10035	DPB1*0401	SLLMWITQCFLPVF	NY-ESO	Cancer
FH10036	DPB1*0401	TQHFVQENYLEY	MAGE-A3	Cancer
FH10037	DPB1*0401	KKYFAATQFEPLA	Oxytocinase	Cancer
FI10187	HLA-DQ2.5	QLQPFPQPELPY	α-I, Gliadin	Celiac disease
FI10188	HLA-DQ2.5	GMATPLLMQALPMGAL	CLIP2	Endogenous Ag

Test Size	Price (EUR)	Price (USD)
50 tests	1.349*	1,549*
150 tests	2.599*	2,999*
500 tests	6.199*	7,099*
1000 tests	10.799*	12,349*

advancedbiomatrix II型胶原蛋白简介

发表于2024年3月24日由上海金畔生物科技有限公司

advancedbiomatrix II型胶原蛋白简介

II型胶原蛋白

溶液，0.5 mg/ml（牛）

目录 #5196

II 型牛胶原蛋白是一种蛋白质家族，特别是在哺乳动物的肉和结缔组织中发现。该产品以无菌溶液形式提供，每瓶约 0.5 mg，约 0.5 mg/ml，溶于 500 mM 乙酸。

产品描述

牛胶原蛋白 II 是一种蛋白质家族，特别是在哺乳动物的肉和结缔组织中发现（约占身体总蛋白质的三分之一）。已经描述了超过两打类型的胶原蛋白；II 型主要存在于透明软骨中（透明软骨中 50% 的蛋白质是 II 型胶原蛋白），也存在于眼睛的玻璃体液中。

该产品以无菌溶液形式提供，每瓶约 0.5 mg，约 0.50 mg/ml，溶于 500 mM 乙酸。II 型胶原蛋白以用户友好的包装形式提供，以供使用和储存。II 型胶原蛋白可用于培养多种细胞类型。II 型胶原蛋白通常用作细胞培养研究的涂层材料、3D 胶原蛋白凝胶的形成或抗体生产的抗原。

参数、测试和方法	II 型胶原蛋白 #5196
灭菌方法	过滤
形式	解决方案
包装尺寸	0.5 毫克 (1 毫升)
贮存温度	2-10°C
胶原蛋白浓度 – 双缩脲	~0.5 毫克/毫升
保质期	自收到之日起至少 6 个月
酸碱度	~2.5
电泳图案 – 考马斯蓝	特征
内毒素 (LAL)	< 5.0 欧/毫升
细胞附着试验	经过
来源	牛软骨

涂装程序

注意： 使用这些建议作为指导来确定适合您的培养系统的最佳包被条件。

从瓶子中取出所需数量的胶原蛋白并分配到稀释容器中。
用 500 mM 乙酸溶液将产品稀释至所需浓度。
轻轻摇晃内容物，直至*混合。
向培养表面添加大约量的稀释 II 型胶原蛋白，确保整个表面都被涂层。
室温孵育，加盖 1-2 小时。
孵化后，吸出任何多余的剩余材料。
用无菌培养基或平衡盐溶液仔细冲洗涂层表面。避免刮伤表面。
从涂层表面吸出剩余的材料。
涂层培养容器现在可以使用了。包被的培养容器可以储存在 2 到 10°C

Dispase II 分散酶II Dispase细胞培养分散酶II(中性蛋白酶)

发表于2024年3月21日由上海金畔生物科技有限公司

Dispase II 分散酶II Dispase细胞培养分散酶II(中性蛋白酶)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。

本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。

产品性质

比活性（Specific Activity）	≥0.8U/mg (+37°C, casein as substrate, pH 7.5)
单位定义（Unit Definition）	在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。
最佳pH（pH Optimum）	6.0-8.5
抑制剂（Inhibitors）	EDTA, EGTA, Hg²⁺, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。
激活剂（Activator）	Ca²⁺，Mg²⁺，Mn²⁺，Fe²⁺，Fe³⁺，Al³⁺。最佳的Ca²⁺浓度为2 mM。本酶制品已含足量的Ca²⁺使其处于最佳活性。

运输和保存方法

冰袋运输。

冻干粉4℃保存，保质期2年。储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存，2个月有效。避免反复冻融。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

母液及工作液配制

1）用Hepe缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。

2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。

【注】：不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。

使用方法

1 组织的解离

1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；

2）用无菌PBS清洗组织块；

3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。

4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。

5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。

6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；

7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。

2 细胞传代

1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；

2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；

3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；

4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；

5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。

HB221208

产品描述

本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。

产品性质

比活性（Specific Activity）	≥0.8U/mg (+37°C, casein as substrate, pH 7.5)
单位定义（Unit Definition）	在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。
最佳pH（pH Optimum）	6.0-8.5
抑制剂（Inhibitors）	EDTA, EGTA, Hg²⁺, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。
激活剂（Activator）	Ca²⁺，Mg²⁺，Mn²⁺，Fe²⁺，Fe³⁺，Al³⁺。最佳的Ca²⁺浓度为2 mM。本酶制品已含足量的Ca²⁺使其处于最佳活性。

运输和保存方法

冰袋运输。

冻干粉4℃保存，保质期2年。储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存，2个月有效。避免反复冻融。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

母液及工作液配制

1）用Hepe缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。

2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。

【注】：不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。

使用方法

1 组织的解离

1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；

2）用无菌PBS清洗组织块；

3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。

6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；

7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。

2 细胞传代

1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；

2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；

3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；

4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；

5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。

HB221208

Dispase II 分散酶II Dispase细胞培养分散酶II(中性蛋白酶)

暂无内容

[1] Chen S, Liu H, Li Z, et al. Epithelial PBLD attenuates intestinal inflammatory response and improves intestinal barrier function by inhibiting NF-κB signaling. Cell Death Dis. 2021;12(6):563. Published 2021 May 31. doi:10.1038/s41419-021-03843-0(IF:8.469)

Collagenase II 胶原酶II型蛋白酶肽链内切酶

发表于2024年3月21日由上海金畔生物科技有限公司

Collagenase II 胶原酶II型蛋白酶肽链内切酶

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解

结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型、II型、III型和IV型，在应用上有所偏向：1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

本品为II型胶原酶，≥125 U/mg solid，可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。

运输和保存方法

室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 胶原酶储存液的配制

向每管100 mg的胶原酶中加入1 mL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成100 mg/mL（即100×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。

2．组织的分离

1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；

2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗涤组织块数次；

3）加入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；

4）于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl₂补充消化可以提高消化效率。

5）已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；

6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3．器官灌注

1）向37℃预热的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl₂有助于提高分离效率；

2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；

3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；

4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

HB221202

[1] Sun X, He X, Zhang Y, et al. Inflammatory cell-derived CXCL3 promotes pancreatic cancer metastasis through a novel myofibroblast-hijacked cancer escape mechanism. Gut. 2022;71(1):129-147. doi:10.1136/gutjnl-2020-322744(IF:23.059)
[2] Wu B, Qiang L, Zhang Y, et al. The deubiquitinase OTUD1 inhibits colonic inflammation by suppressing RIPK1-mediated NF-κB signaling. Cell Mol Immunol. 2022;19(2):276-289. doi:10.1038/s41423-021-00810-9(IF:11.530)
[3] Yu Q, Han F, Yuan Z, et al. Fucoidan-loaded nanofibrous scaffolds promote annulus fibrosus repair by ameliorating the inflammatory and oxidative microenvironments in degenerative intervertebral discs. Acta Biomater. 2022;148:73-89. doi:10.1016/j.actbio.2022.05.054(IF:8.947)
[4] Feng C, Xiong Z, Wang C, et al. Folic acid-modified Exosome-PH20 enhances the efficiency of therapy via modulation of the tumor microenvironment and directly inhibits tumor cell metastasis. Bioact Mater. 2020;6(4):963-974. Published 2020 Oct 9. doi:10.1016/j.bioactmat.2020.09.014(IF:8.724)
[5] Wang Y, Sun Q, Ye Y, et al. FGF-2 signaling in nasopharyngeal carcinoma modulates pericyte-macrophage crosstalk and metastasis. JCI Insight. 2022;7(10):e157874. Published 2022 May 23. doi:10.1172/jci.insight.157874(IF:8.315)
[6] Zheng Q, Liu P, Gao G, et al. Mitochondrion-processed TERC regulates senescence without affecting telomerase activities. Protein Cell. 2019;10(9):631-648. doi:10.1007/s13238-019-0612-5(IF:7.575)
[7] Guo H, Yin W, Zou Z, et al. Quercitrin alleviates cartilage extracellular matrix degradation and delays ACLT rat osteoarthritis development: An in vivo and in vitro study. J Adv Res. 2020;28:255-267. Published 2020 Jun 24. doi:10.1016/j.jare.2020.06.020(IF:6.992)
[8] Wang Y, Zhao M, Li W, et al. BMSC-Derived Small Extracellular Vesicles Induce Cartilage Reconstruction of Temporomandibular Joint Osteoarthritis via Autotaxin-YAP Signaling Axis. Front Cell Dev Biol. 2021;9:656153. Published 2021 Apr 1. doi:10.3389/fcell.2021.656153(IF:6.684)
[9] Zhang W, Wang H, Yuan Z, et al. Moderate mechanical stimulation rescues degenerative annulus fibrosus by suppressing caveolin-1 mediated pro-inflammatory signaling pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(5):1395-1412. Published 2021 Apr 3. doi:10.7150/ijbs.57774(IF:6.582)
[10] Zhu L, Yang Y, Yan Z, et al. Controlled Release of TGF-β3 for Effective Local Endogenous Repair in IDD Using Rat Model. Int J Nanomedicine. 2022;17:2079-2096. Published 2022 May 9. doi:10.2147/IJN.S358396(IF:6.400)
[11] Zhou T, Xiang DK, Li SN, Yang LH, Gao LF, Feng C. MicroRNA-495 Ameliorates Cardiac Microvascular Endothelial Cell Injury and Inflammatory Reaction by Suppressing the NLRP3 Inflammasome Signaling Pathway. Cell Physiol Biochem. 2018;49(2):798-815. doi:10.1159/000493042(IF:5.500)
[12] Zheng Y, Chen Y, Lu X, et al. Inhibition of Histone Deacetylase 6 by Tubastatin A Attenuates the Progress of Osteoarthritis via Improving Mitochondrial Function. Am J Pathol. 2020;190(12):2376-2386. doi:10.1016/j.ajpath.2020.08.013(IF:4.307)
[13] Wang C, Wang Y, Wang C, et al. Therapeutic application of 3B-PEG injectable hydrogel/Nell-1 composite system to temporomandibular joint osteoarthritis. Biomed Mater. 2021;17(1):10.1088/1748-605X/ac367f. Published 2021 Nov 19. doi:10.1088/1748-605X/ac367f(IF:3.715)
[14] Hu H, Luo SJ, Cao ZR, et al. Depressive Disorder promotes Hepatocellular Carcinoma metastasis via upregulation of ABCG2 gene expression and maintenance of self-renewal. J Cancer. 2020;11(18):5309-5317. Published 2020 Jul 9. doi:10.7150/jca.45712(IF:3.565)
[15] Du Y, Chen X, Yang H, et al. Expression of Oocyte Vitellogenesis Receptor Was Regulated by C/EBPα in Developing Follicle of Wanxi White Goose. Animals (Basel). 2022;12(7):874. Published 2022 Mar 30. doi:10.3390/ani12070874(IF:2.752)

产品描述

结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

本品为II型胶原酶，≥125 U/mg solid，可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。

运输和保存方法

室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 胶原酶储存液的配制

2．组织的分离

1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；

2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗涤组织块数次；

3）加入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；

4）于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl₂补充消化可以提高消化效率。

5）已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；

6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3．器官灌注

1）向37℃预热的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl₂有助于提高分离效率；

2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；

4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

HB221202

Q：只用于分离细胞，选哪种胶原酶合适？

A：对于组织解离，常使用粗制胶原酶制剂，例如弹性蛋白酶，胰蛋白酶或木瓜蛋白酶等；对于胶原蛋白结构和生物合成研究，常使用更高纯度的胶原酶制剂，不含其他蛋白水解活性。

Q：要把肿瘤细胞分散成单个细胞做流式检测，选择哪一种胶原酶比较适合？需要区分肿瘤发生的部位吗？后续用来做流式，不同消化强度对细胞表面抗原的影响大吗？

A：会影响细胞表面抗原，可以选择对抗原影响较小的胶原酶Ⅲ、胶原酶Ⅳ。

Q：胶原酶使用会受到血清影响吗？

A：胶原不会受到培养细胞所用的血清影响。

Q：胶原酶的使用会受哪些抑制剂影响？

A：胶原酶的抑制剂有 EDTA 、EGTA 等；二是重金属离子（Hg2+,Pb2+,Cd2+）；还有一些化学试剂如 Cysteine、 histidine、DTT、2-mercaptoethanol、o-phenanthroline 等对胶原酶也有抑制作用。

Q：用 PBS 溶解可以吗？用什么工作液浓度溶解？

A：建议在 Hank’s，Earle’s 或者其他平衡盐溶液中溶解，推荐使用工作浓度 0.05 % ~0.5 % (w/v)。

Q：实验过程中消化作用不佳

A：(1)如果是酶活不强或钙离子不足导致，应在低温干燥条件下储存胶原酶，胶原酶溶液分装后冻存(2)如果是钙离子不足导致，应将胶原酶溶液中钙离子浓度设置为 5mM

Q：使用过程中出现细胞死亡

A：（1）如果是蛋白酶过量，应减少蛋白酶接触时间或是加入白蛋白或灭活血清（2）如果是 pH 改变应使用缓冲液（如 HBSS）；经常检查并重新调节 pH（3）如果氧气太少，应给消化液通无菌空气

Q：实验中出现细胞受损怎么办？

A：如果是蛋白酶过多导致，应减少蛋白酶用量或是加入白蛋白或灭活血清

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)

发表于2024年3月21日由上海金畔生物科技有限公司

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)

产品编号: RG010S

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
RG010S	萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)	100次	478.00元

碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (Enhanced Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit II)，是一种以萤光素(luciferin)为底物高灵敏度检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。

本产品是萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG009)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，即RG009为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品，即RG010，为RG009的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能达到国外主要同类产品同等水平。本产品的性能和用途与Promega公司的Luciferase Assay System基本相同。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1，本产品的发光强度与国外同类产品(Competitor P)相近或略优(图1A)，发光信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B)。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)

图1. 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)的检测效果对比图。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)与碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)的检测效果完全一致。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为化学发光强度的检测效果对比图，图B为化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品，本产品的发光强度可以达到甚至略优于国外同类产品(图1A)，特别适用于Firefly luciferase表达水平低的样品检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平较高，或者样品数量较多、对发光信号的稳定性要求较高，也可以使用发光强度和灵敏度稍低，但发光信号更稳定的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006/RG007)。

本产品操作简单，检测速度快，从样品制备到完成检测仅需约20分钟。只需用试剂盒提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II，再取100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定，信号半衰期约10分钟。

本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存，配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性非常好，反复冻融5次对检测效果无明显影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。萤火虫萤光素酶检测试剂II在4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果，室温保存3天可保留60%以上的检测效果，37 ℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂II即使仅保留约50%的检测效果，仍可以满足各种常规检测的要求。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[1]。本试剂盒的检测原理参考图2。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用[2]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。

本试剂盒RG010S和RG010M分别可以测定100个和1000个样品。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
RG010S-1	报告基因细胞裂解液	60ml
RG010S-2	萤火虫萤光素酶检测缓冲液	10ml
RG010S-3	萤火虫萤光素酶底物	1瓶
—	说明书	1份

产品编号	产品名称	包装
RG010M-1	报告基因细胞裂解液	RG010S-1×10
RG010M-2	萤火虫萤光素酶检测缓冲液	RG010S-2×10
RG010M-3	萤火虫萤光素酶底物	RG010S-3×10
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃避光保存，至少一年有效。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II -80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。

注意事项：

对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)。

为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂II。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成萤火虫萤光素酶检测试剂II使用。

尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。

检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。。

样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。

为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG027/RG028)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型	96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔)	100	150	200	300	500

注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
2. 准备检测试剂：融解冻存的萤火虫萤光素酶检测缓冲液，将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II，并平衡至室温。注：冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。
3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
4. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
5. 各孔加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比较可以参考图1。

常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。

参考文献：
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.

相关产品：

产品编号	产品名称	包装
RG005/RG006	萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒	100/1000次
RG007S/M	萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II	100/1000次
RG009S/M	萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)	100/1000次
RG010S/M	萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)	100/1000次
RG016/RG017	海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒	100/1000次
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RG089S/M	Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒	100/1000次
RG126S/M	萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液	10/100ml
RG127S/M	萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液(增强型)	10/100ml
RG129S/M	海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液	10/100ml
RG132S/M	双萤光素酶报告基因细胞裂解液	10/100ml

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