qRT-PCR一步法多重定量PCR混合酶|One Step qRT-PCR Enzyme Mix

qRT-PCR一步法多重定量PCR混合酶|One Step qRT-PCR Enzyme Mix

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FAQ

COA

已发表文献

One Step qRT-PCR Enzyme Mix Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit的核心酶,是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的混合酶

产品包含耐热Hifair® V Reverse Transcriptase的逆转录酶和抗体法封闭的UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase热启动聚合酶,可高效合成第一链cDNA,并进行扩增反应

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13197ES92

 (10000 T)

13197ES95

 (300000 T)

13197ES96

(400000 T)

13197-A

One Step qRT-PCR Enzyme Mix

10 mL

300 mL

400 mL

适用机型

ABI系列:ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列:Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Roche系列:Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

其他系列:Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

运输与保存方式

冰袋运输。-20保存,有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2.
为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途!

 

建议反应体系buffer为13110试剂盒组分)

组分

体积(μL)

体积(μL)

终浓度

2×Hifair® V MP Buffer

12

15

One Step qRT-PCR Enzyme Mix

1

1.5

Primer/Probe Mix (10 μM)

1-4

1-4

0.4 μM

模板 RNA

1-5

1-10

RNase Free H2O

To 25

To 30

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.4 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系:推荐使用25 μL、30 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序
 

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

10 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

45

60℃b

30 secc

【注】                                                                                             

a) 逆转录:42℃或者50℃均可,时间10-15 min。

b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整CDC官方推荐的ORF1ab和N引物,退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

相关产品
 

产品名称

货号

规格

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit

11213ES60

100 T

11213ES80

1000 T

11213ES92

10000 T

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)

11214ES60

100 T

11214ES80

1000 T

11214ES92

10000 T

Hieff UNICON® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶

10717ES72

250 U

Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体

31303ES60

100 μg

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

 

11300ES92

10000 U

11300ES93

5×10000 U

Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)

10703ES10

10 KU

10703ES60

100 KU

10703ES70

200 KU

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制剂

10603ES05

2 KU

10603ES10

10 KU

10603ES20

100 KU

10603ES60

200 KU

Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100 U

10303ES76

500 U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

10128ES72

250 μL

10128ES80

1 mL

COVID-19-pseudovirus(2019-nCOV假病毒)

11900ES03

1 mL

SARS-pseudovirus(SARS假病毒)

11903ES70

1 mL

MERS-pseudovirus(MERS假病毒)

11904ES70

1 mL

 

HB200605

qRT-PCR一步法多重定量PCR混合酶|One Step qRT-PCR Enzyme Mix

暂无内容

[1] Nie R, Sun Y, Lv H, et al. 3D printing of MXene composite hydrogel scaffolds for photothermal antibacterial activity and bone regeneration in infected bone defect models. Nanoscale. 2022;14(22):8112-8129. Published 2022 Jun 9. doi:10.1039/d2nr02176e(IF:7.790)
[2] Wu X, Ren Y, Wen Y, et al. Deacetylation of ZKSCAN3 by SIRT1 induces autophagy and protects SN4741 cells against MPP+-induced oxidative stress. Free Radic Biol Med. 2022;181:82-97. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2022.02.001(IF:7.376)
[3] Gong W, Zhang S, Zong Y, et al. Involvement of the microglial NLRP3 inflammasome in the anti-inflammatory effect of the antidepressant clomipramine. J Affect Disord. 2019;254:15-25. doi:10.1016/j.jad.2019.05.009(IF:4.839)
[4] Huang S, Liu M, Chen G, et al. Favorable QTLs from Oryza longistaminata improve rice drought resistance. BMC Plant Biol. 2022;22(1):136. Published 2022 Mar 23. doi:10.1186/s12870-022-03516-w(IF:4.215)
[5] Zhang Y, Zhu Z, Zhai W, Bi Y, Yin Y, Zhang W. Expression and purification of asprosin in Pichia pastoris and investigation of its increase glucose uptake activity in skeletal muscle through activation of AMPK. Enzyme Microb Technol. 2021;144:109737. doi:10.1016/j.enzmictec.2020.109737(IF:3.448)

One Step qRT-PCR Enzyme Mix Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit的核心酶,是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的混合酶

产品包含耐热Hifair® V Reverse Transcriptase的逆转录酶和抗体法封闭的UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase热启动聚合酶,可高效合成第一链cDNA,并进行扩增反应

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13197ES92

 (10000 T)

13197ES95

 (300000 T)

13197ES96

(400000 T)

13197-A

One Step qRT-PCR Enzyme Mix

10 mL

300 mL

400 mL

适用机型

ABI系列:ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列:Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Roche系列:Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

其他系列:Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

运输与保存方式

冰袋运输。-20保存,有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2.
为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途!

 

建议反应体系buffer为13110试剂盒组分)

组分

体积(μL)

体积(μL)

终浓度

2×Hifair® V MP Buffer

12

15

One Step qRT-PCR Enzyme Mix

1

1.5

Primer/Probe Mix (10 μM)

1-4

1-4

0.4 μM

模板 RNA

1-5

1-10

RNase Free H2O

To 25

To 30

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.4 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系:推荐使用25 μL、30 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序
 

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

10 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

45

60℃b

30 secc

【注】                                                                                             

a) 逆转录:42℃或者50℃均可,时间10-15 min。

b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整CDC官方推荐的ORF1ab和N引物,退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

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产品名称

货号

规格

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit

11213ES60

100 T

11213ES80

1000 T

11213ES92

10000 T

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)

11214ES60

100 T

11214ES80

1000 T

11214ES92

10000 T

Hieff UNICON® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶

10717ES72

250 U

Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体

31303ES60

100 μg

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

 

11300ES92

10000 U

11300ES93

5×10000 U

Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)

10703ES10

10 KU

10703ES60

100 KU

10703ES70

200 KU

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制剂

10603ES05

2 KU

10603ES10

10 KU

10603ES20

100 KU

10603ES60

200 KU

Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100 U

10303ES76

500 U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

10128ES72

250 μL

10128ES80

1 mL

COVID-19-pseudovirus(2019-nCOV假病毒)

11900ES03

1 mL

SARS-pseudovirus(SARS假病毒)

11903ES70

1 mL

MERS-pseudovirus(MERS假病毒)

11904ES70

1 mL

 

HB200605

qRT-PCR一步法多重定量PCR混合酶|One Step qRT-PCR Enzyme Mix

暂无内容

[1] Nie R, Sun Y, Lv H, et al. 3D printing of MXene composite hydrogel scaffolds for photothermal antibacterial activity and bone regeneration in infected bone defect models. Nanoscale. 2022;14(22):8112-8129. Published 2022 Jun 9. doi:10.1039/d2nr02176e(IF:7.790)
[2] Wu X, Ren Y, Wen Y, et al. Deacetylation of ZKSCAN3 by SIRT1 induces autophagy and protects SN4741 cells against MPP+-induced oxidative stress. Free Radic Biol Med. 2022;181:82-97. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2022.02.001(IF:7.376)
[3] Gong W, Zhang S, Zong Y, et al. Involvement of the microglial NLRP3 inflammasome in the anti-inflammatory effect of the antidepressant clomipramine. J Affect Disord. 2019;254:15-25. doi:10.1016/j.jad.2019.05.009(IF:4.839)
[4] Huang S, Liu M, Chen G, et al. Favorable QTLs from Oryza longistaminata improve rice drought resistance. BMC Plant Biol. 2022;22(1):136. Published 2022 Mar 23. doi:10.1186/s12870-022-03516-w(IF:4.215)
[5] Zhang Y, Zhu Z, Zhai W, Bi Y, Yin Y, Zhang W. Expression and purification of asprosin in Pichia pastoris and investigation of its increase glucose uptake activity in skeletal muscle through activation of AMPK. Enzyme Microb Technol. 2021;144:109737. doi:10.1016/j.enzmictec.2020.109737(IF:3.448)