Gaussia-Lumi高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072S)

Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒

产品编号: RG072S

产品包装:100次
选择包装

100次 1000次

说明书下载

598.00 10

价格: ¥ 598.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG072S Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次 598.00元
RG072M Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次 3198.00元

碧云天生产的Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(Gaussia-Lumi™ Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit),也称Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测试剂盒(Gaussia-Lumi™ Gaussia Luciferase Assay Kit),简称Gaussia-Lumi™,是一种高灵敏度、高信号稳定性的以肠腔素(Coelenterazine)为底物来检测分泌型、非ATP依赖的高斯萤光素酶(Gaussia luciferase,简称Gluc)活性的一步法检测试剂盒。与碧云天的高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)相比,本试剂盒可以无需收集细胞或细胞培养上清,只需将与培养液等体积的检测工作液加入到细胞培养板内反应5-10分钟,即可进行化学发光检测,使用更便捷,特别适用于高通量筛选(High-throughput screening)。本试剂盒也可以用于细胞培养上清样品的检测。

本产品的性能达到甚至优于国外主要相似产品。本产品的性能和用途与Thermo Scientific公司的Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit)相似,用于细胞上清检测时本产品的检测灵敏度显著优于国外同类产品(Competitor T)。

本产品发光信号特别稳定。发光信号在30分钟内基本恒定,在60分钟内信号波动不超过10%,在120分钟内信号波动不超过20% (图1),信号半衰期长达5小时之久,特别适用于96孔板或384孔板中高斯萤光素酶活性的大批量测定。

Gaussia-Lumi高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072S)

图1. 碧云天Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072)对转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒pGLuc-Dura-SV40-C (D2770)的293T细胞的检测效果。图A为本产品对使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒48小时的293T细胞的化学发光强度的检测效果图,不同时间表示加入检测试剂后的时间;图B为本产品对转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒48小时的293T细胞的化学发光稳定性的检测效果图。实际读数会因细胞种类、高斯萤光素酶表达体系、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,完成检测仅需约10分钟。本产品比其它高斯萤光素酶测定方法如碧云天的高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)更加简单快捷,细胞可以在同一块多孔板中培养和检测,无需取细胞上清,也无需去上清后裂解细胞,检测时只需把试剂盒提供的Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物和Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液按照1:100比例混合配制成Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液,再与培养细胞等体积混合,反应5-10分钟后即可进行化学发光检测,并且产生的化学发光信号非常稳定,信号半衰期长达5小时。使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测。

本产品稳定性好。本试剂盒中的Gaussi-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液和Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X)的稳定性均较好。Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液反复冻融10次、4℃保存7天或37℃保存1天对检测效果基本无影响,37℃保存3天检测效果下降不超过5%,37℃保存7天检测效果下降不超过20%。Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X)在4℃保存1周、室温保存1天的检测效果下降不超过10%;室温保存3天、37℃保存1天,仍可保留80%以上的活力。

本产品使用灵活便捷。本产品配制成的Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液不仅可以等体积加入到细胞培养孔中对细胞内和细胞培养上清中的总高斯萤光素酶进行直接检测,也可以用于细胞培养上清样品的检测,还可以用于高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒中的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG021-1)制备的细胞样品的检测。

本产品兼容性强。本产品兼容各种常见培养液,正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇、萤光素酶抑制剂等对信号和稳定性基本没有影响,常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。

高斯萤光素酶(Gaussia luciferase)是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。高斯萤光素酶为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kDa),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。与萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)和天然的海肾萤光素酶(Renilla luciferase)相比,高斯萤光素酶具有以下优点:高斯萤光素酶为自然分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无需裂解细胞,样本的分析和酶活检测只需要几分钟,使得操作更加方便,更适用于报告基因不同时间点的检测和高通量筛选;高斯萤光素酶是可获得的较亮的萤光素酶,它的发光强度是萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的萤光信号的1000多倍,具有更高的检测灵敏度;反应无须ATP,不受ATP影响;高斯萤光素酶的稳定性更高,对温度和pH的耐受性强,可适用于多种培养基[1-3]。

高斯萤光素酶产生的生物萤光是由于腔肠嘧啶的氧化作用,这种反应不需要三磷酸腺苷(ATP)或其它辅助因子。在氧气存在的条件下,高斯萤光素酶可以催化腔肠素(Coelenterazine)氧化成Coelenteramide。在Coelenterazine氧化的过程中,会发出波长为480nm左右的生物萤光(Bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(Luminometer)或液闪测定仪进行测定,萤光强度与高斯蛋白表达量相关,与高斯蛋白表达的启动子活性成正比。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(Reporter gene)质粒,然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。本试剂盒的检测原理参考图2。

Gaussia-Lumi高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072S)

图2. Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072)的检测原理图。

碧云天同时提供高斯萤光素酶报告基因的空载体质粒和直接使用的报告基因质粒,详见相关产品。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶、海肾萤光素酶和高斯萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶和高斯荧光素酶。

对于96孔板,推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测工作液,反应体系的总体积为200μl,此时本试剂盒分别可以进行100次或1000次检测。对于384孔板,推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测工作液,总体积为50μl,此时本试剂盒可以进行400次或4000次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测工作液的体积比例须为1:1。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
RG072S-1 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG072S-2 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X) 100μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG072M-1 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液 100ml
RG072M-2 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X) 100μl×10
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,6个月有效。RG072-1 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液,-20℃保存一年有效;RG072-2 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X),-20℃避光保存6个月有效,-80℃避光保存一年有效。

注意事项:

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细胞样品和Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液均需平衡至室温后再进行测定。可将检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测工作液使用。

本试剂盒中的Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液在反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。

Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X)配制在含有高浓度乙醇的溶液中。由于乙醇容易挥发,有时会在初次使用时发现体积明显小于包装体积的情况,此时用无水乙醇把体积补足至包装体积,并混匀后即可使用。

Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用,-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降,因此不可配制成工作液后长期保存。

细胞的培养和转染等可以使用普通的透明96/384孔板,但是使用多功能酶标仪对细胞培养上清或细胞裂解样品进行化学发光的检测时,请使用孔和孔之间不透光的96/384孔白板或黑板。如果使用普通透明的96/384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑或全白96/384孔细胞培养板(FCP966/FCP968/FCP983/FCP985)、白色或黑色透明底96/384孔细胞培养板(FCP963/FCP965/ FCP986/FCP987)。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

如需高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液,可以单独选购碧云天生产的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 细胞的准备:
使用适合进行化学发光检测的96孔板,每孔接种100μl细胞(如使用384孔板,每孔接种25μl细胞,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养和细胞转染的常规方法培养和转染细胞。如有需要,可加入药物处理细胞。继续培养16-72小时。
2.检测试剂的准备:
a.试剂准备:融解Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液,并平衡至室温。Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X)放置于冰浴或冰盒上备用。
b.Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液的配制:按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)检测工作液的量,计算所需的Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液的量。按照1:100的比例混合适量Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X)和Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液,配制成Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液。例如,5ml Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测缓冲液中加入50μl Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测底物(100X)充分混匀后即可配制成约5ml Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液。
3.总高斯萤光素酶活性的快速检测:
a.取出细胞培养板在室温平衡10分钟(通常不宜超过30分钟)。
b.96孔板每孔加入Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液100μl (384孔板每孔25μl),混匀。
c.室温(约25℃)孵育5-10分钟,使发光信号趋于稳定。
d.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
4.细胞培养上清或细胞裂解液的检测:
a.对于细胞培养上清:根据具体实验情况,酌情收集5-200μl细胞培养上清至1.5ml离心管中或收集5-20μl细胞培养上清至检测化学发光用的96孔白板或黑板中,平衡至室温。如有需要,可以在不同的时间点收集培养基,以监测萤光素酶表达的变化。如果不能立即检测,可以将收集好的细胞培养基存放于-20℃。样品在-20℃至少可保存一个月。
对于细胞裂解液样品:去除细胞培养液,用PBS洗涤1次,每孔加入高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG021-1) 100μl,在摇床上以中等速度摇动裂解15分钟。在光学显微镜下检查细胞是否完全溶解,如果溶解不完全,继续摇动裂解15分钟。如果细胞最初培养在48孔、24孔、12孔或6孔板中,每孔酌情加入约100-500μl裂解液。
b.取5-20μl细胞培养上清或细胞裂解样品加入96孔白板或黑板。
注1:优先推荐使用5μl样品,样品体积较小时化学发光更加稳定。
注2:对于同一批样品的检测,必须固定所用样品的体积,使不同样品之间的检测数据具有更好的可比性,因为样品体积的大小对于最终的化学发光值会产生一定的影响。
c.每孔加入100μl Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶检测工作液,混匀。
d.室温(约25℃)孵育5-10分钟,使发光信号趋于稳定。
e.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

常见问题:
1.Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2.可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

参考文献:
1.Tannous BA, Kim DE, Fernandez JL, Weissleder R, Breakefield XO. Mol Ther. 2005. 11(3):435-43.
2.Szent-Gyorgyi C, et al. Proc SPIE. 1999. 3600(1):4-11.
3.Tannous BA. Nat Protoc. 2009. 4:582-591.

相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG021 高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG072 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG135 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
D2098 pGLuc (报告基因质粒) 1/100µg
D2100 pGLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2103 pGLuc-TA (报告基因质粒) 1/100µg
D2104 pGLuc-Dura-TA (报告基因质粒) 1/100µg
D2107 pGLuc-Dura-miR (报告基因质粒) 1/100µg
D2114 pARE-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2181 pISRE-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2209 pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2225 pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2261 pSTAT3-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2204 pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2764 pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒) 1/100µg
D2770 pGLuc-Dura-SV40-C (报告基因质粒) 1/100µg
FCP966 BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒,320个/箱
FCP968 BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒,320个/箱
FCP963 BeyoGold™白色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP965 BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP981 BeyoGold™ 384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP983 BeyoGold™全白384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP985 BeyoGold™全黑384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP986 BeyoGold™白色透明底384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP987 BeyoGold™黑色透明底384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱

Gaussia-Lumi高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072S)
Gaussia-Lumi高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072S)

物质安全数据单

下载

Gaussia-Lumi高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072S)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献:

发表回复